[发明专利]巢式PCR快速检测胶胞炭疽菌的体系建立及应用在审
| 申请号： | 201810429586.1 | 申请日： | 2018-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN108611433A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 韩珊;余鹏举;朱天辉;万雪琴;刘应高;谯天敏;李姝江;王若梅;张博阳;李鸿鹏;黄焱焱;阮若玉;汪昱伶 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 李鹏 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 核桃炭疽病 胶胞炭疽菌 上游引物序列 下游引物序列 致病菌 巢式PCR 试剂盒 检测 预警 特异性引物 快速检测 体系建立 种植区 侵染 农业经济 核桃 应用 敏感 防治 传播 考察 | ||
1.用于巢式PCR检测核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌的特异性引物，其特征在于，它由第一轮引物对和第二轮引物对构成，其中，第一轮引物对的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，第一轮引物对的下游引物序列如SEQ ID No.2所示，第二轮引物对的上游引物序列如SEQ ID No.3所示，第二轮引物对的下游引物序列如SEQ ID No.4所示。
2.根据权利要求1所述的用于巢式PCR检测核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌的引物在巢式PCR检测核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌上的应用。
3.一种巢式PCR试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物。
4.一种检测核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)采取待测的样品，并提取总DNA；
(2)以总DNA为模板使用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的引物对进行第一轮PCR扩增；
(3)取第一轮PCR扩增产物为模板使用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的引物对进行第二轮PCR扩增；
(4)结果判断：检测第二轮PCR扩增产物，结果出现302bp特征条带说明所述样品具有了核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌；未出现302bp特征条带说明所述样品未具有核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一轮PCR扩增体系如下：扩增体系：TaqDNA聚合酶12.5ul，SEQ ID No.1、SEQ ID No.2所示引物各1ul，DNA模板1ul，双蒸水9.5ul，总体积25ul；PCR扩增条件如下：94℃变性5min；然后94℃变性1min，55℃退火55s，72℃延伸1min，共36个循环；最后72℃延伸10min，终止温度为4℃；所述第二轮PCR扩增体系如下：扩增体系：TaqDNA聚合酶12.5ul，SEQ ID No.3、SEQ ID No.4所示引物各1ul，第一轮PCR扩增产物1ul，双蒸水9.5ul，总体积25ul；PCR扩增条件如下：94℃变性5min；然后94℃变性1min，69℃退火1min，72℃延伸1min，共35个循环；最后72℃延伸8min，终止温度为4℃。
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