[发明专利]一种盐酸法舒地尔杂质5-异喹啉磺酸甲酯的高效液相色谱分析检测方法

说明书

本发明提供了一种盐酸法舒地尔相关杂质5‑异喹啉磺酸甲酯含量测定的方法，采用反相高效液相色谱峰面积归一化法定量分析，色谱条件为：色谱柱：ACCHROM XAmide柱；流速：0.9～1.1ml/min；检测波长为238nm；柱温：28～32℃；进样量：20ul；流动相A：0.05mol/l磷酸二氢铵水溶液；流动相B：甲醇；A:B＝(91～94)：(6～9)(V:V)；本方法便于生产和质控过程中产品质量的控制，具有成本低，简单易行，准确性及精密度高、稳定性及重现性好、灵敏度高的优点。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及一种盐酸法舒地尔杂质5-异喹啉磺酸甲酯的高效液相色谱分析检测方法。

背景技术

盐酸法舒地尔(Fasudil Hydrochloride)，其化学名为六氢-1-(5-异喹啉磺酰基)-1H-1，4-二氮杂卓盐酸盐,分子式：C₁₄H₁₇N₃O₂S·HCL，分子量：327.83。

其结构式为：

法舒地尔为一种RHO激酶抑制物及胞内Ca²⁺拮抗剂，其作用方式是通过增加肌球蛋白轻链磷酸酶的活性扩张血管，降低内皮细胞的张力，改善脑组织微循环，不产生和加重脑的盗血，同时可拮抗炎性因子，保护神经抗凋亡，促进神经再生。临床可用于预防及改善蛛网膜下腔出血后的血管痉挛，选择性扩张痉挛的血管，改善心脑缺血，改善脑灌注，增强大脑抗缺氧能力，抑制脑神经细胞受损，促进神经元轴突生长，减轻受累脑细胞组织的炎性反应。

结合盐酸法舒地尔工艺路线，对可能存在的工艺杂质、降解产物进行了全面分析。

结合盐酸法舒地尔工艺路线，起始原料可能带来遗传毒性物质5-异喹啉磺酸甲酯。

目前盐酸法舒地尔已公开的有关物质测定方法为HPLC法(见中国药典2015年版二部)，具体如下：

有关物质取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取lml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以1.0％(v/v)三乙胺水溶液(用磷酸调节pH值至7.0)-甲醇(50:50)(v/v)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按盐酸法舒地尔峰计算不低于3000。盐酸法舒地尔峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取灵敏度溶液20μl，注入液相色谱仪，使主成分色谱峰的信噪比应不小于10。精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍(0.1％)(w/w)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0％)(w/w)。供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的色谱峰忽略不计(0.05％)(w/w)。

经研究发现，在实际操作过程中，上述方法存在以下不足：

(1)此条件下5-异喹啉磺酸甲酯和盐酸法舒地尔分离效果较差，色谱峰基本重叠在一起，不能达到基线分离；

(2)此条件下5-异喹啉磺酸甲酯吸收极弱，不能检出。

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐酸法舒地尔杂质5-异喹啉磺酸甲酯的高效液相色谱分析检测方法，本发明的技术方案如下，一种盐酸法舒地尔毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯含量测定的方法，其特征在于其色谱条件为：

a.色谱柱：ACCHROM XAmide柱；

b.流动相：A：0.05mol/l磷酸二氢铵水溶液；

B：甲醇；