[发明专利]七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法及应用

权利要求书

1.一种七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的的方法，其特征在于，所述方法采用用于检测肠道致病菌沙门氏菌的特异的重组酶聚合酶引物、探针及七管道芯片进行检测；

其中,所述重组酶聚合酶引物和探针为：

正向引物的序列为SEQ ID No.1，

反向引物的序列为SEQ ID No.2，

探针的序列为SEQ ID No.3。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述七管道芯片通过以下方法制备：

(1)芯片模板的制作：利用微加工方法制作芯片模板；

(2)芯片浇筑，排气泡，固化：将二甲基硅氧烷与固化剂按比例混合均匀，倒入芯片模板中，利用真空排除气泡，于烘箱中实现高温固化；

(3)芯片打孔与封合：利用注射器针头对芯片打孔形成进样口与出样口，经过等离子体处理后，与玻片进行永久封合。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述固化剂选自以下一种或多种：二月二丁基肉桂酸锡，聚(二甲基-甲基氢硅氧烷)，优选为聚(二甲基-甲基氢硅氧烷)；所述二甲基硅氧烷与固化剂的比例为9:1～11:1,优选为10:1；所述高温固化温度为75-85℃,优选为80℃；所述高温固化时间为25～35min，优选为30min。

4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用根据权利要求1所述的方法进行检测，优选地，所述试剂盒为实时等温重组酶聚合酶扩增检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中所述正向引物的浓度为100～100nM，优选为300～500nM，最优选为420nM；所述反向引物的浓度为100～100nM，优选为300～500nM，最优选为420nM；所述探针的浓度为10～200nM，优选为100～150nM，最优选为120nM。

6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括细菌DNA提取试剂和检测试剂；

优选地，所述检测试剂包括MgAc溶液，蒸馏水，buffer，重组酶、聚合酶和单链结合蛋白的冻干酶粉末，阴性对照和阳性对照。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为蒸馏水，所述阳性对照为含有沙门氏菌全基因组DNA的提取液。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述MgAc溶液浓度为40～140mM，最优选为140mM。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括便携式的荧光设备。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法或根据权利要求4至9中任一项所述的试剂盒在在制备用于检测沙门氏菌的产品中的应用。