[发明专利]七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法及应用

说明书

本发明提供了一种七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法和应用，包括用于检测肠道致病菌沙门氏菌的特异的重组酶聚合酶引物，探针及七管道芯片，其中正向引物的序列为SEQ ID No:1，反向引物的序列为SEQ ID No:2，探针对应的序列为SEQ ID No:3，七管道芯片以高聚物为材料，通过微加工方法制备。七管道芯片包含七个有序排列的微米通道，能够实现多重信号的区分以及防止多个体系之间的交叉污染。本发明提供一种基于微流控芯片的快速检测肠道致病菌沙门氏菌的方法，以实现对沙门氏菌的快速，安全，特异，简单的现场检测。本发明同时提供了多样品同时检测的可能性，为防止沙门氏菌疫情的发生，保障食品安全提供了有效方案。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法及应用。

背景技术

沙门氏菌属于革兰氏阴性菌，是一种肠道致病菌，目前已发现一千种。感染沙门氏菌容易引起伤寒，感染性腹泻，肠热症，肠胃炎等疾病。世界卫生组织(WHO)已将沙门氏菌列为严重危害和中等危害的食源性致病菌。因此，对沙门氏菌的简单快捷的检测，能够有效抑制公共疾病的突发。

目前，常用于沙门氏菌检测的方法有，微生物培养法、免疫检测方法和聚合酶链式反应(PCR)。然而，这些方法不仅操作繁琐，受到检测人员专业和经验的限制，而且花费昂贵。等温核酸扩增不需要变温操作，因此不需要昂贵的温度循环仪，操作简单，近年来受到学术界和企业界的高度关注，各种类型的等温核酸扩增也相应的被开发。其中，重组酶聚合酶等温扩增以其反应温度低，反应速度快，灵敏度高，特异性好等特点而备受重视。微流控技术的发展，使得核酸体系能够以较少的体积去实现检测，同时也为同一指标多个样品的同时检测提供了解决方案。

发明内容

因此，本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种涉及一种基于七管道芯片的肠道致病菌沙门氏菌的等温重组酶聚合酶扩增检测方法及应用。

在阐述本发明的技术方案之前，定义本文中所使用的术语如下：

术语“RPA”是指：重组酶聚合酶等温扩增技术((Recombinase PolymeraseAmplification)。

术语“FAM”是指：羧基荧光素。

术语“buffer”是指：缓冲液。

为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的的方法，所述方法采用用于检测肠道致病菌沙门氏菌的特异的重组酶聚合酶引物、探针及七管道芯片进行检测；

其中,所述重组酶聚合酶引物和探针为：

正向引物的序列为SEQ ID No.1，

反向引物的序列为SEQ ID No.2，

探针的序列为SEQ ID No.3。

根据本发明第一方面的方法，其中，所述七管道芯片通过以下方法制备：

(1)芯片模板的制作：利用微加工方法制作芯片模板；

(2)芯片浇筑，排气泡，固化：将二甲基硅氧烷与固化剂按比例混合均匀，倒入芯片模板中，利用真空排除气泡，于烘箱中实现高温固化；

(3)芯片打孔与封合：利用注射器针头对芯片打孔形成进样口与出样口，经过等离子体处理后，与玻片进行永久封合。

优选地，所述步骤(2)中，所述固化剂选自以下一种或多种：二月二丁基肉桂酸锡，聚(二甲基-甲基氢硅氧烷)，优选为聚(二甲基-甲基氢硅氧烷)；所述二甲基硅氧烷与固化剂的比例为9:1～11:1,优选为10:1；所述高温固化温度为75～85℃,优选为80℃；所述高温固化时间为25～35min，优选为30min。