[发明专利]HPLC指纹图谱的构建方法及HPLC指纹图谱

权利要求书

1.三七药材HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)分别称取适量三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃和Rf对照品，加甲醇溶解，制成浓度为30-70μg·mL^-1的混合对照品溶液；

(2)称取三七样品，置于容器中，加入甲醇配置为浓度为30-50mg/mL的溶液，称重，超声提取30-60min，冷却至室温，用甲醇补充损失的溶剂，提取液用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；

(3)分别取步骤(1)的混合对照品溶液和步骤(2)的供试品溶液做高效液相色谱分析；

(4)利用对照品对照法，采用LC-MS或HPLC-MS指证指纹图谱中的化学成份，建立三七药材HPLC指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的三七药材HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：其中高效液相色谱分析的条件设置如下：色谱柱为Kromasil C18色谱柱，250×4.6mm，5μm，流动相为乙腈和水，流速为1mL·min-1；柱温为30℃；检测波长：203nm；进样量：20μL。

3.根据权利要求2所述的三七药材HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：其中高效液相色谱分析中流动相采取梯度洗脱，具体比例如下设置：

乙腈：0-5min 5-20％；5-20min 20-36％；20-45min 36-80％；45-50min 80-100％；50-60min 100％；60-70min 100-5％；

水：0-5min 95→80％；5-20min 80→64％；20-45min 64→20％；45-50min 20→0％；50-60min 0％；60-70min 0-95％。

4.根据权利要求3所述的三七药材HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：三七HPLC指纹图谱测定方法经过方法学考察，5次实验各特征峰的相对峰面积和相对保留时间的精密度和稳定性RSD均小于4.24％；9次实验的相对峰面积测试重现性RSD小于6.47％。

5.通过权利要求1-4任一项所述的三七药材HPLC指纹图谱的构建方法所构建的三七药材HPLC指纹图谱，其特征在于：所述三七药材为三七主根、筋条、剪口、叶和花，其中所有三七样品的共有峰有10种，三七主根、筋条、剪口的共有峰有13种，叶和花的特征峰有1种。

6.根据权利要求5所述的三七药材HPLC指纹图谱，其特征在于：三七皂苷R1为参照峰，三七样品的10种共有峰及其相对保留时间如下：1号峰0.257～0.258min；4号峰14.338～14.364min；5号峰1.078～1.080min；7号峰1.594～1.604min；8号峰1.649～1.655min；9号峰1.719～1.723min；11号峰1.820～1.823min；14号峰3.567～3.633min；15号峰3.769～3.776min；17号峰4.427～4.437min。

7.根据权利要求6所述的三七药材HPLC指纹图谱，其特征在于：三七地下部分主根、筋条、剪口的除三七样品的10种共有峰以外的3种共有峰及其相对保留时间如下：2号峰0.404～0.407min；10号峰0.751～0.752min；13号峰3.13～3.217min。

8.根据权利要求6所述的三七药材HPLC指纹图谱，其特征在于：三七叶和花的特征峰及其相对保留时间如下：3号峰0.658～0.659min。