[发明专利]HPLC指纹图谱的构建方法及HPLC指纹图谱

说明书

本发明三七药物分析领域，具体涉及三七药材和三七总皂苷的HPLC指纹图谱的构建方法及HPLC指纹图谱包括如下步骤：(1)分别称取适量三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃和Rf对照品，加甲醇溶解，制成浓度为30‑70μg·mL^‑1的混合对照品溶液；(2)称取三七样品，置于容器中，加入甲醇配置为浓度为30‑50mg/mL的溶液，称重，超声提取30‑60min，冷却至室温，用甲醇补充损失的溶剂，提取液用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；(3)分别取步骤(1)的混合对照品溶液和步骤(2)的供试品溶液做高效液相色谱分析；(4)利用对照品对照法，采用LC‑MS或HPLC‑MS指证指纹图谱中的化学成份，建立三七药材HPLC指纹图谱。本发明可以用于三七药材及总皂苷提取物的质量分析以及提供依据。

技术领域

本发明三七药物分析领域，具体涉及三七药材和三七总皂苷的HPLC指纹图谱的构建方法及HPLC指纹图谱。

背景技术

三七为五加科Araliaceae人参属Panax植物三七Panax notoginsng(Burk)F.H.Chen。始载于《本草纲目》，主产于我国云南、广西等省，功能散瘀止血、消肿定痛，为临床常用中药。三七的主要有效成分为三七总皂苷，具有扩张血管，降低心肌耗氧量，抑制血小板凝集，延长凝血时间，降血脂，清除自由基，抗炎，抗氧化等药理作用，其中含量较高并有市售标准品的有三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rd、Rc和Rf等。目前，商品三七的规格品种多样，质量不一。05版药典规定三七为其原植物的根和根茎，其中主根为临床所用三七，支根习称筋条，根茎习称剪口。三七总皂苷提取物生产厂家常用三七剪口或筋条为原料，民间也有使用三七叶和花。而不同的三七药用部位及其提取物的主要皂苷类成分的含量差别明显。CN201710569313.2公开了一种对三七及其伪品的快速鉴别方法，具体步骤为，收集三七及其伪品若干，将样品粉碎，过120目筛，分别放入密封的塑料瓶中；采集样品的近红外光谱；分别优化系统聚类分析最佳类内聚类和类间距离，偏最小二乘判别分析的因子数，极限学习机激励函数和隐含层节点数；考察系统聚类分析、偏最小二乘判别分析和极限学习机三种化学模式识别方法的鉴别效果，选取最佳的化学模式识别方法。CN201710569315.1公开了一种利用紫外可见光谱及化学模式识别对三七及其伪品进行鉴别的方法，具体步骤为：收集一定数目的三七及其伪品，干燥，粉碎，过120目筛，存贮在密封的塑料瓶中；确定紫外可见光谱仪器的测试参数，采集样品的紫外可见光谱；对每类中药分别用KS法划分，2/3的样品用作训练，1/3的样品用作预测，将所有类别的训练数据合并为总的训练集，预测数据合并为总的预测集；确定PLS-DA因子数，建立PLS-DA模型，将预测集样品的光谱代入到PLS-DA模型中，得到预测集中样品的类别。上述两片文献分别从红外分析和紫外分析的方法进行鉴别，且只作为真伪的鉴别，无法很好地辨别三七的药用部位。HPLC，即高效液相色谱检测方向具有高效、高灵敏度等特点。因此，建立一种三七不同药用部位及其提取物中主要成分的HPLC指纹图谱分析方法，比较不同药用部位和不同规格三七及其提取物的差异具有重要意义。

发明内容

本发明针对上述问题，提供三七药材和三七总皂苷的HPLC指纹图谱的构建方法及HPLC指纹图谱。

本发明所采取的技术方案如下：三七药材HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)分别称取适量三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rb₂、Rb₃和Rf对照品，加甲醇溶解，制成浓度为30-70μg·mL^-1的混合对照品溶液；