[发明专利]一种用于检测布氏菌的荧光定量重组酶聚合酶扩增方法在审
| 申请号： | 201810434374.2 | 申请日： | 2018-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN108753997A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 陈义平;秦立得;南文龙;陈羽琪 | 申请（专利权）人： | 中国动物卫生与流行病学中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266032 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 布氏菌 荧光定量 引物组 扩增 荧光定量PCR仪 反应程序 高效灵敏 交叉反应 结果判定 快速检测 扩增模板 特异性强 样品检测 荧光探针 自动完成 反应仪 高通量 检出限 聚合酶 通用型 一次性 重组酶 检测 拷贝 配置 统计 | ||
1.一种用于检测布氏菌的荧光定量RPA引物组和荧光探针，其特征在于，所述的引物和探针的信息如下：
BCSP 31-F:5'-TGCATCCCGGCGCAGAACGCTTTTACAAGGAA-3'、
BCSP 31-R:5'-ATAACGAGCTGCCGCAATGTCACCCTTCAATT-3'、
BCSP 31-Probe:5'-GCGGGCGTGCTGAAATAATCCCTCAAT GA-FAM-dT-THF-GG-BHQ1-dTTCCTGATATCTTA-dSpacer-3'；
其中，FAM-dT表示携带有荧光素基团的胸腺嘧啶核苷酸，THF表示四氢呋喃连接子，BHQ1-dT表示携带有荧光淬灭基团BHQ1的胸腺嘧啶核苷酸，3'用dSpacer阻断链的延伸。
2.权利要求1所述的物组和荧光探针再制备检测布氏菌的制品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制品为荧光定量RPA检测试剂盒。
4.一种荧光定量RPA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有权利要求1所述的物组和荧光探针。
5.一种利用权利要求1所述的物组和荧光探针检测布氏菌的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
1)待检测基因组DNA的提取：用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌DNA；
2)RPA步骤：将权利要求1所述的物组和荧光探针及各反应组分，分别加入反应体系中，40℃反应20min，每30s收集一次FAM荧光信号；
3)结果检测：依据荧光定量扩增曲线判定检测结果。
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