[发明专利]一种早期快速诊断肺炎支原体的方法

权利要求书

1.一种用于肺炎支原体检测的一步法可视化环介导等温扩增检测的引物，其特征在于正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP的序列如下表：

FIP(F1C、F2)和BIP(B1C、B2)分别由2部分组成，两者之间以TTTT链接。

2.一种用于肺炎支原体一步法可视化环介导等温扩增检测的试剂盒，其特征在于包含权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包含以下LAMP反应液：

4.肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测方法，其特征在于使用权利要求1所述的引物组进行LAMP反应，反应管呈天蓝色的为阳性，表明存在肺炎支原体，反应管呈紫色的为阴性，表明待测样本不含肺炎支原体。

5.根据权利要求4所述的肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测方法，其特征在于具体包括如下步骤：①对待检样本进行DNA粗提取；②以提取的DNA为模板，以所述的特异性引物F3、B3、FIP及BIP为引物配制LAMP反应液；③将配置好的LAMP反应液于63℃反应60min，观察各反应管的颜色变化，天蓝色为阳性，紫色为阴性。

6.根据权利要求5所述的肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测方法，其特征在于所述的DNA粗提取液的提取方法为：将咽拭子加入到含1mL TE的无菌管中，充分混匀后吸取0.5mL加0.5mL 2×ROSE提取缓冲液(提取缓冲液为1％SDS，10mmol/L Tris，0.3mol/L EDTA，1％PVPP，pH8.0.)，混匀后置于90℃水浴中，不时颠倒混匀。孵育20min后，置于冰浴中5min。4℃下保存备用。