[发明专利]一种早期快速诊断肺炎支原体的方法

说明书

本发明的名称叫一种早期快速诊断肺炎支原体的方法，属于生物检测领域，涉及肺炎支原体一步法可视化环介导等温扩增检测方法。主要要解决的技术问题是：1.建立Mp LAMP反应体系和LAMP反应体系指示剂选择2.一步法Mp基因组DNA提取的建立本发明公开了肺炎支原体一步法可视化环介导等温扩增检测方法，使用本发明所述的环介导等温扩增体系，通过在体系中添加羟基萘酚蓝指示剂，实现检测结果可视化。本发明通过将肺炎支原体DNA粗提取方法与LAMP检测相结合，以快速粗提的待测样品DNA作为LAMP的反应模板，节省了常规提取DNA所花费的时间，大大简化操作过程，提高检测效率。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及肺炎支原体一步法可视化环介导等温扩增检测方法。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma peumoniae，Mp)是引起原发性非典型肺炎等呼吸道感染性疾病的常见病原体，通过呼吸道传播，并以婴幼儿多见。支原体肺炎的临床表现不典型，与其他常见呼吸道疾病所致的感染非常相似，仅凭临床症状，无病原学诊断，往往难以做出准确的早期诊断。目前血清学检测和核酸检测是临床常用的肺炎支原体检测方法，血清学诊断易受患儿年龄、病程和抗生素治疗的影响，产生漏诊，错诊。

LAMP是一种体外恒温扩增特异DNA片段的新技术，它可在短时间内使极微量的核酸片段扩增至数百万个拷贝，具有特异性强、灵敏度高和简便快速的优点，它已广泛应用于人类流行病的检测。但该技术与一步法核酸提取相结合并应用于人类肺炎支原体的检测还未见报道。

发明内容

本发明的目的针对现有技术的不足之处，提供一种肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种用于肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测的引物组，正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP的序列如下表：

FIP(F1C、F2)和BIP(B1C、B2)分别由2部分组成，两者之间以TTTT链接。

所述的引物组在制备肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测试剂盒中的应用。

一种用于肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测的试剂盒，包含本发明所述的引物组。

所述的试剂盒包含以下LAMP反应液：

肺炎支原体的一步法可视化环介导等温扩增检测方法，使用本发明所述的引物组进行LAMP 反应，由于体系中添加HNB实现扩增结果可视化；反应管呈天蓝色为阳性，表示被检样品含有肺炎支原体；紫色为阴性，表示被检样品不含肺炎支原体。

附图说明

图1：可视化LAMP反应体系优化电泳图。

A.Mg²⁺浓度优化。M：DL2000 DNA Marker；1～5.Mg²⁺终浓度分别为2.0，3.0，4.0，5.0， 6.0mmol/L。

B.dNTP浓度优化。M：DL2000 DNA Marker；1～6.dNTPs浓度分别为0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L、0.8mmol/L、1.0mmol/L、1.2mmol/L.

C.Bst DNA聚合酶浓度优化。M：DL2000 DNA Marker；1～5：Bst DNA polymer分别为 3.2，4.8，6.4，8.0，9.6U。