[发明专利]一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法

说明书

本发明涉及一种采用高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法，包括如下步骤：(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，配制标准品溶液；(2)采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得色谱图；(3)绘制线性回归方程；(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，将其色谱峰的峰面积带入所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。本发明的方法可以最大限度地将丹参酮IIA与其类似物杂质分离，确保丹参酮IIA被充分提取出来，并选择特定的流动相有效地提高检测的准确性。利用本发明的高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量时，具有专属性好，灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及中药中有效成分的分析技术领域，具体涉及一种通过高效液相色谱法测定丹参酮IIA含量的方法。

背景技术

丹参酮ⅡA为桔红色针状结晶,易溶于乙醇、丙酮、乙醚、苯等有机溶剂，微溶于水。其广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，如片剂、胶囊、冲剂、针剂，具有扩展血管、降压、抗栓的功能，对治疗冠心病、心绞痛、心律过速有显著疗效。

然而，目前对于药材尤其时中成药中丹参酮IIA含量的测定，存在提取时受相似结构杂质干扰导致分离困难、检测精确度不高等缺陷。因此，亟待开发一种步骤简便、精度高的丹参酮IIA含量测定方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种通过高效液相色谱测定丹参酮IIA的含量的方法。

本发明针对的含有丹参酮IIA的待测样品可以是丹参药材、丹参提取物或含有丹参酮IIA的中成药。所述丹参提取物可采用本领域常规的方法制备得到，例如：以乙醇为溶剂回流提取得到。本发明所述含有丹参酮IIA的中成药是本领域已知市售的品种，例如：复方血栓通胶囊、归龙接骨胶囊、赤丹胶囊等。本发明通过大量实践发现，当多种功效药材以及辅料共同加工成中成药时，由于其它成分和杂质的干扰，导致丹参酮IIA含量的提取步骤更为繁琐，结果准确性难以保证，而本发明提供的方法通过巧妙地选择甲醇作为提取溶剂，可以使丹参酮IIA被简便且充分地提取，为含量的准确检测提供保障，并选择特定比例的流动相进行洗脱分离；本发明提供的方法尤其适合待测样品为含有丹参的中成药时的情况。

具体而言，本发明提供的方法包括如下步骤：

(1)取丹参酮IIA标准品，以甲醇为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；

(2)将所述多份标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C18色谱柱、含有78～82％甲醇且余量为水的流动相进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；

(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中丹参酮IIA色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；

(4)取含有丹参酮IIA的待测样品，干燥粉碎后，加入甲醇进行提取，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中丹参酮IIA色谱峰的峰面积带入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中丹参酮IIA的含量。

本发明通过大量实践发现，在提取丹参酮IIA尤其是含有大量且复杂杂质的情况下，常规用于提取丹参酮IIA的溶剂如乙醇、乙腈等对于丹参酮IIA的提取效率较低，而甲醇的提取效率高(比乙醇提高约25％，比乙腈提高约15％)。此外，不同浓度的甲醇水溶液对丹参酮IIA的提取效率也有明显差异，当采用纯甲醇时提取效率最好，且其他水溶性杂质较少。

具体而言，本发明所述待测样品溶液的制备方法具体为：称取待测样品，每克样品加入10～15ml甲醇，超声提取后离心，取上清液；提取至少两次后合并上清液。本发明通过大量实践发现，对于1g的待测样品而言，10～15ml甲醇单次提取并不能实现对丹参酮IIA的充分提取，而当提取2次以上并合并提取液，则可确保目标成分充分溶出。为了进一步减少杂质的影响，可将所述上清液过0.45μm滤膜后，再上样于高效液相色谱。