[发明专利]一种生产嵌合抗原受体修饰的γδT细胞的方法

权利要求书

1.FPPS表达被抑制的肿瘤细胞在如下A1)-A8)中至少一种中的应用:

A1)促进γδ T细胞扩增;

A2)制备促进γδ T细胞扩增的产品;

A3)促进γδ T细胞分化;

A4)制备促进γδ T细胞分化的产品;

A5)生产CAR-γδ T细胞;将表达嵌合抗原受体的载体与γδ T细胞共培养,得到CAR-γδ T细胞,所述表达嵌合抗原受体的载体为表达嵌合抗原受体的慢病毒载体;所述共培养体系中含有FPPS表达被抑制的肿瘤细胞；所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的；所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞；所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA；所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA；所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示；所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示；所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示；

A6)制备生产CAR-γδ T细胞的产品;将表达嵌合抗原受体的载体与γδ T细胞共培养,得到CAR-γδ T细胞,所述表达嵌合抗原受体的载体为表达嵌合抗原受体的慢病毒载体;所述共培养体系中含有FPPS表达被抑制的肿瘤细胞；所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的；所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞；所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA；所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA；所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示；所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示；所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示；

A7)提高A5)或A6)中所述慢病毒对γδ T细胞的转染率;

A8)制备提高A5)或A6)中所述慢病毒对γδ T细胞的转染率的产品;

所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的;

所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞;

所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA;

所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA;

所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示;所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示;所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示;

所述肿瘤细胞为K562细胞；

所述A1）或A3）为非疾病诊断治疗应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述γδ T细胞与所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞的个数比为（1-10）:1；

所述方法还包括如下步骤：当培养体系中细胞浓度到达（1.5-2）×10⁶个/ml时，每2-4天向所述培养体系中添加一次IL-2；

所述IL-2在所述培养体系中的终浓度为（100-1000）IU/mL。

3.一种生产CAR-γδ T细胞的方法，包括如下步骤：将表达嵌合抗原受体的载体与γδT细胞共培养，得到CAR-γδ T细胞；所述培养体系中含有FPPS表达被抑制的肿瘤细胞；

所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的；

所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞；

所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA；

所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA；

所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示；所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示；所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示；

所述肿瘤细胞为K562细胞。