[发明专利]一种生产嵌合抗原受体修饰的γδT细胞的方法

说明书

本发明公开了一种生产嵌合抗原受体修饰的γδT细胞的方法。本发明将靶向于FPP合成酶的shFPPS通过慢病毒载体转染K562细胞，下调了K562细胞中FPPS的表达量，构建了FPPS表达量降低的K562‑shFPPS细胞系。本发明将K562‑shFPPS细胞系加入γδT细胞培养体系中与γδT细胞进行共培养，发现K562‑shFPPS细胞系能促进γδT细胞的体外分化和扩增。本发明还将表达CAR的慢病毒载体加入含有该细胞系的γδT细胞培养体系中进行共培养，发现K562‑shFPPS细胞系还可以有效提高CAR基因的转染率。本发明提供的方案有效解决了大规模生产CAR‑γδT细胞的技术瓶颈，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种生产嵌合抗原受体修饰的γδ T细胞的方法。

背景技术

过继性细胞免疫治疗是将体外培养、活化、基因修饰的自体或异体免疫细胞回输给患者，用于发挥抗肿瘤活性。嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)修饰的T细胞治疗技术(CAR-T技术)是通过基因工程技术修饰免疫效应细胞，使被修饰的细胞能特异性识别和杀伤表达特异性抗原的靶细胞，从而达到特异性清除肿瘤细胞的目的。特异靶向于B淋巴细胞表面标志物CD19分子的CAR-T细胞，在治疗B淋巴细胞恶性肿瘤中的疗效最为显著，可使90％的复发难治的B系急性淋巴细胞白血病患者获得完全缓解。虽然目前针对CD19抗原的CAR-T细胞治疗B淋巴细胞性肿瘤，具有极高的短期治疗效果。但仍有相当一部分病人在治疗达到完全缓解后会再次复发。复发的一个重要原因是输入的CAR-T细胞因为缺少有效的抗原刺激，在患者体内的数量不断减少，因此不能保持长期的抗肿瘤活性。

现有CAR-T技术是根据αβ T细胞的天然活性设计的，一般修饰的效应细胞是αβ T细胞。αβ T细胞输入异体，会引发严重的移植物抗宿主反应，因此，目前的CAR-T治疗技术多以自体细胞治疗为主，极大的限制了临床应用的灵活性，大大提高了治疗成本。而γδ T细胞不会引发严重的移植物抗宿主反应，因此是开发通用型CAR-T产品更好的选择。

αβ T细胞介导的是适应性免疫应答，需要完成淋巴细胞再循环才能有效活化并发挥相应的免疫学功能。而γδ T细胞介导的是天然免疫应答，能在抗原抗体发生反应的部位即时发挥免疫学效应，因此CAR-γδ T细胞潜在的抗肿瘤作用会更直接、更迅速，可以通过肿瘤部位的局部注射清除肿瘤，避免脱靶效应引发的强烈不良反应。另外，αβT细胞利用多样性的αβ TCR识别由主要组织相容性复合体(MHC)提呈的抗原短肽。天然情况下，识别一个特定的MHC-抗原肽复合物的αβ T细胞的数量非常少，因此需要数量上的扩增才能发挥对特定抗原的免疫应答能力。而γδ T细胞是一类数量较低的T淋巴细胞亚类，大多数γδ TCR识别非肽类化合物，不需要MHC的提呈。不像αβ TCR可变区的多样性组成，γδ TCR的可变区的多样性非常有限，因此，尽管αβ T细胞的总数量远多于γδ T细胞，但比较对一种特定化合物或抗原具有识别能力的特定T细胞的数量的话，γδ T细胞要高于αβ T细胞。