[发明专利]7β-羟基甾醇脱氢酶突变体及其在制备熊脱氧胆酸中的应用

权利要求书

1.一种7β-羟基甾醇脱氢酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如下：

(1) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第18位谷氨酸替换为苏氨酸，第22位赖氨酸替换为丙氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；

(2) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第17位苏氨酸替换为丙氨酸，第39位甘氨酸替换为天冬氨酸；

(3) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第18位谷氨酸替换为苏氨酸；

(4) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第22位赖氨酸替换为天冬氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸；

(5) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第22位赖氨酸替换为天冬氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸；

(6)将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第39位甘氨酸替换为丙氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺；

(7) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第39位甘氨酸替换为丙氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺，243位天冬酰胺替换为丝氨酸；

(8) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第44位赖氨酸替换为甘氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸，243位天冬酰胺替换为丝氨酸；

(9)将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第44位赖氨酸替换为甘氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(10) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；

(11) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(12) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸，第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(13) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为酪氨酸；

(14) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为酪氨酸，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(15) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(16) 将如序列表中SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第114位缬氨酸替换为酪氨酸，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸。

2.一种分离的核酸，其特征在于，所述的核酸编码如权利要求1所述的7β-羟基甾醇脱氢酶突变体。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求2所述的核酸。

4.一种重组表达转化体，其特征在于，所述重组表达转化体包含如权利要求3所述的重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达转化体，其特征在于，所述重组表达转化体为包含如权利要求3所述的重组表达载体的大肠杆菌或毕赤酵母。

6.一种重组7β-羟基甾醇脱氢酶突变体催化剂，其特征在于，所述的重组7β-羟基甾醇脱氢酶突变体催化剂是以下形式中的任意一种：

(1) 培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述7β-羟基甾醇脱氢酶突变体的转化体细胞；

(2) 培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述7β-羟基甾醇脱氢酶突变体的粗酶液；

(3) 培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述7β-羟基甾醇脱氢酶突变体的粗酶液，将所述7β-羟基甾醇脱氢酶突变体的粗酶液干燥得到的粗酶粉。