[发明专利]基于微流控芯片检测游离甲状腺素fT4试剂盒及制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒及制备和检测方法，该试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)微流控芯片包被；(2)荧光微球标记；(3)微流控芯片组装；(4)定标品的制备；(5)得基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒。制备得到的游离甲状腺素fT4试剂盒采用竞争法进行测定，选取高灵敏度的时间分辨荧光物作为标记物，在荧光微球上进行抗原的标记，利用免疫竞争反应进行分析检测，所制备的试剂性能可达同等化学发光试剂的水平。免疫反应后，使用清洗液将多余组分完全去除后，对免疫反应结合上的荧光微球进行检测读数，避免了引入显色液进入芯片内部反应不充分或者显色后读数不及时的问题。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，尤其是涉及一种基于微流控芯片检测游离甲状腺素fT4试剂盒及制备和检测方法。

背景技术

微流控芯片技术是以微管道网络为结构特征，采用微加工技术在几平方厘米大小的芯片上刻蚀出微管道网络和其它功能单元，从而制备出包含进样、反应、分离、检测于一体的快速、高效、低耗的微型分析装置。微流控芯片在检测平台中具有试剂消耗少，反应时间短，自动化程度高的特点。在目前的研究中，芯片的微型化却给前期样品分离和配套集成带来不少困难，同时在样品固定，洗脱等方面也存在不少问题。

微流控芯片检测主要有以下几点优势：

1)器件微小且没有对人为操作，试剂消耗量很少；

2)通过设计不同微流路实现在同一芯片中不同试剂的混合反应，减少繁琐的生物实验操作缩短检测所需时间；

3)微流控芯片可与电路接合实现自动化控制；

4)微流控芯片以及配套检测设备体积小巧，易于便携。

游离甲状腺素(fT4)是一种由甲状腺合成并分泌的激素，也是构成甲状腺、脑垂体和下丘脑参与的负反馈机制的完整性不可缺少的成分。对合成代谢有影响作用，T4有两分子的二碘酪氨酸(DIT)在甲状腺内偶联生成。T4与甲状腺球蛋白结合储存在甲状腺滤泡的残腔中，在TSH的调节下分泌释放。

在血清中99％以上的T4以与其他蛋白质结合的形式存在，其主要结合蛋白为甲状腺结合球蛋白(TBG)，次要结合蛋白为白蛋白和甲状腺结合前白蛋白(TBPA)。其余的甲状腺素未与运转蛋白发生结合，在循环系统中以游离形式存在。未结合的甲状腺素(或称为游离甲状腺素fT4)具有代谢活性，也是三碘甲状腺原氨酸(T3)的前体。

游离甲状腺素的浓度与甲状腺素的分泌活性和代谢降解作用相关，在甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进的患者体内，其游离的甲状腺素浓度与总甲状腺素浓度同时发生变化。当由于甲状腺素结合蛋白(特别时甲状腺结合球蛋白)浓度变化而引起总甲状腺素浓度发生改变时，测定游离甲状腺素浓度具有重要临床意义。在健康个体内，甲状腺结合球蛋白(TBG)的浓度相对恒定，但是在某些条件下(如妊娠和接受甾类激素治疗)下，TBG的浓度可能发生变化，在上述条件下，游离甲状腺素的浓度未发生变化，但是总甲状腺素浓度会随着TBG的浓度变化而发生改变。

在中国专利文献CN104614521A中公开了一种微流控芯片，包括柔性聚合物层和基片，柔性聚合物层和基片键合在一起，所述芯片中设有微沟道系统，所述微沟道系统包括缓冲液入口、样品入口、磁珠入口、废液出口、微阀、微泵区、磁珠塞区、循环区及检测区。

上述技术方案采用灵敏度较低的比浊法，检测免疫磁珠和待测物之间的免疫反应所形成的络合物进行反应物前后的浊度变化，来进行判定待测物的浓度。相对而言，在采用免疫比浊这一方法学来说，由于不需要额外的配对抗体以及发光标记物，因此整体芯片结构设计较为简单。通过磁场在芯片沟道中形成的特定区域富集磁珠，样品持续通过此部分磁珠塞后与另一测磁珠结合，从而形成两个以上的磁珠团聚。