[发明专利]一种肿瘤淋巴结高转移模型的建立及荧光快速检测方法

说明书

本发明公开一种大动物肿瘤淋巴结高转移模型的建立及术中快速实时检测含有肿瘤细胞淋巴结的方法。包括以下步骤：建立兔舌肿瘤模型，并基于兔舌肿瘤模型建立兔颈部淋巴结高转移模型；在兔颈部高转移模型建立成功后，使用一种内源性物质5‑氨基酮戊酸(5‑ALA)，利用其代谢产物原卟啉(PPIX)的荧光对兔颈部转移淋巴结进行快速精准的检测。本发明操作简便，可靠性高，充分完整的模拟了人舌癌淋巴结转移的临床特征以及生物学特性，为人肿瘤的淋巴结转移的治疗及切除提供了研究模型，也为术中可视化的实时肿瘤淋巴结清扫术提供新的手段，在生物医疗和光动力诊断领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医疗领域和光学领域，涉及动物模型的建立和疾病的光动力诊断，具体涉及一种肿瘤淋巴结高转移模型的建立及荧光快速检测方法。

背景技术

在现代医疗高度发展的今天，肿瘤作为一种没有被完全攻克的疾病，在中国每年造成的死亡病例已达到281万(2017年中国最新癌症数据.中国肿瘤临床与康复，2017，24(6)：760.)。尽管可以通过手术、放疗和化疗等手段进行癌症原发灶的控制，但是仍有一部分病人死于肿瘤复发。淋巴结转移是造成肿瘤复发的首要原因：浸润的肿瘤细胞穿过淋巴管壁，脱落后随淋巴液到达周围淋巴结，并以此为中心发展为新的肿瘤。以口腔癌为例，发生转移后其5年生存率只有50％-55％(口腔癌淋巴管生成及淋巴转移的研究进展.山东医药，2014，54(9)：94-99.)。

淋巴结转移具有情况复杂、检测困难等特点，因此，及时建立高转移淋巴结模型，有助于更有效、更准确地对肿瘤转移的发生和发展规律进行研究。稳定、重复性好、近似人类癌症的大动物模型在研究中至关重要。兔的存活时间相对较长，且在体内淋巴结转移率高。将肿瘤接种在兔舌上建立颈部高转移淋巴结模型，有利于对转移淋巴结进行长期性的研究。

5-氨基酮戊酸(5-ALA)是一种内源性物质，广泛存在于机体的组织器官内，本身不具有光动力效应，但能在体内转化为具有光动力效应的原卟啉(PPIX)，因此使用5-氨基酮戊酸作为荧光显影剂可以实现对转移淋巴结的荧光快速检测。原卟啉(PPIX)在正常细胞与肿瘤细胞中的代谢速率存在明显差异，因此肿瘤细胞在接受激发光照射时可以产生特征性的红色荧光，据此可以辨别肿瘤组织位置，对于含有转移肿瘤细胞的淋巴结同样可以使用原卟啉进行可靠鉴别。

发明内容：

本发明提供了一种兔颈部淋巴结高转移模型的建立方法，完整地模拟了人头颈部淋巴结转移的临床特点和生物学特征，为人肿瘤的淋巴结转移的治疗及切除提供了研究模型。同时提供了一种运用光学手段检测颈部转移淋巴结的方法，较好的解决了转移淋巴结与非转移淋巴结的区分问题，为术中可视化的实时肿瘤淋巴结清扫术提供新的手段，在生物医疗和光动力诊断领域具有广阔的应用前景。

本发明包括以下步骤：

1.一种肿瘤淋巴结高转移模型的建立及荧光快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获取兔上皮鳞癌VX2组织块；

(2)建立兔舌癌模型；

(3)建立兔颈部淋巴结转移模型；

(4)建立兔颈部高转移淋巴结模型；

(5)使用荧光显影剂对肿瘤转移淋巴结进行实时可视化诊断；

(6)采集肿瘤转移淋巴结荧光光谱数据，根据光谱数据划分阈值，判断转移与非转移淋巴结。

所述步骤(1)为在购买的荷瘤种兔上无菌切取肿瘤，并将其剪碎成为体积约0.5mm³-1.5mm³的组织块。

所述步骤(1)具有简便易行，成模时间短，出模率高的特征。

所述步骤(1)所使用的肿瘤为兔上皮来源的VX2肿瘤组织块。