[发明专利]一种高效制备的重组Hispidalin抗菌肽及其应用在审
| 申请号： | 201810441305.4 | 申请日： | 2018-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN108484743A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 樊振川;孟德梅;吕玉洁;孙雪晴;李文娟;刘庆艳;贾雪霞 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C07K14/415 | 分类号： | C07K14/415;C07K1/22;C12N15/29;C12N15/81;A61K38/16;A61P31/04;A61P31/12;A61P35/00;A61P37/02 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300222 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗菌肽 毕赤酵母表达系统 抑制肿瘤细胞生长 应用 蛋白酶稳定性 生物技术领域 抗菌肽基因 密码子优化 起始密码子 温度稳定性 终止密码子 毕赤酵母 高效制备 基因工程 免疫调节 诱导表达 抗病毒 偏好性 溶血性 碱基 位点 制备 愈合 细胞 | ||
1.一种Hispidalin抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽具体为mHispidalin抗菌肽，所述mHispidalin抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的一种Hispidalin抗菌肽，其特征在于，所述mHispidalin抗菌肽核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.权利要求1或2所述抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)重组表达载体的构建
将mHispidalin抗菌肽基因片段连接到pPICZαA表达载体上构建重组表达载体；
(2)构建重组菌株
重组表达载体经SacI酶线性化处理，并将线性化处理后的重组表达载体转入毕赤酵母宿主细胞，获得mHispidalin抗菌肽的表达菌株；
(3)抗菌肽的表达
将mHispidalin抗菌肽的表达菌株进行发酵培养，以甲醇为唯一碳源对其进行诱导表达，取发酵液上清进行亲和纯化，获得mHispidalin抗菌肽产品。
4.如权利要求3所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述毕赤酵母宿主细胞为毕赤酵母GS115。
5.如权利要求3所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的方法为：将mHispidalin抗菌肽的表达菌株于BMGY培养基中，28℃，220rpm摇床培养，待OD600达到8-10时，把BMGY培养基等体积更换为BMMY培养基，28℃，220rpm摇床培养，每24h补充经过滤除菌的100％甲醇，连续培养至96h。
6.如权利要求5所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述甲醇补充量的体积百分比为1.5％。
7.如权利要求3所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述亲和纯化采用镍柱亲和纯化法纯化发酵液上清中的目的蛋白，获得Hispidalin抗菌肽纯品；镍柱亲和纯化时，使用20，40，60mM的低浓度咪唑进行梯度漂洗去除杂蛋白，使用500mM的高浓度咪唑进行洗脱。
8.如权利要求7所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，将洗脱液置换为50mM，pH 7.4的Tris-HCl溶液，冷冻干燥成粉末，即为mHispidalin纯品。
9.权利要求1或2所述mHispidalin抗菌肽的应用。
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