[发明专利]基于酶催化可控自组装生物条码检测HTLV-II DNA的方法

权利要求书

1.一种基于末端脱氧核苷酸转移酶催化生物条码自组装对HTLV-II DNA进行树突状放大检测的试剂盒，包括末端脱氧核苷酸转移酶、捕获探针1功能化的磁性微球、捕获探针2与报道探针功能化的纳米金颗粒、鲁米诺试剂、血红素试剂、温育试剂；所述捕获探针1的序列为：5'-ATG GGG TCC CAG GTG AG-3'，3'端修饰一个生物素；所述捕获探针2的序列为：5'-AAA AAA AAA AAA AAA AAA TCT TAT CTT-3'，3'端修饰一个生物素；报道探针的序列为5'-ACA TGC TTG GAC TGC-3'，5'端修饰一个生物素；

所述修饰的捕获探针1的磁性微球制备方法如下：将捕获探针1溶于1×Tris-EDTA缓冲液中，制备储备溶液；将10 μmol/L的捕获探针1与10 mg/mL的包裹链霉亲和素的磁性微球加入到超纯水中，并在室温下温育10 min，使捕获探针1结合到包裹链霉亲和素的磁性微球上；利用磁性分离，移除溶液中过量的捕获探针1，获得捕获探针1功能化的包裹链霉亲和素的磁性微球；捕获探针1：磁性微球：超纯水溶液的配比为1 μL：1 μL：10 μL；

所述纳米金颗粒的制备方法，包括以下步骤：将捕获探针2与报道探针溶于1×Tris-EDTA缓冲液中，制备储备溶液；将0.5 mg/mL的纳米金颗粒、1 μmol/L的捕获探针2和1 μmol/L的报道探针加入超纯水中，并在室温下温育10 min，通过生物素-链霉亲和素相互作用，形成捕获探针2与报道探针功能化的纳米金颗粒；纳米金颗粒：捕获探针2：报道探针：超纯水的配比为1 μL：0.45 μL：4.05 μL：1200 μL。

2.一种基于末端脱氧核苷酸转移酶催化生物条码自组装对HTLV-II DNA进行树突状放大检测的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器包括：末端脱氧核苷酸转移酶、捕获探针1功能化的磁性微球、捕获探针2与报道探针功能化的纳米金颗粒、鲁米诺试剂、血红素试剂、温育试剂；所述捕获探针1的序列为：5'-ATG GGG TCC CAG GTG AG-3'，3'端修饰一个生物素；所述捕获探针2的序列为：5'-AAA AAA AAA AAA AAA AAA TCT TAT CTT-3'，3'端修饰一个生物素；报道探针的序列为5'-ACA TGC TTG GAC TGC-3'，5'端修饰一个生物素；

所述修饰的捕获探针1的磁性微球制备方法如下：将捕获探针1溶于1×Tris-EDTA缓冲液中，制备储备溶液；将10 μmol/L的捕获探针1与10 mg/mL的包裹链霉亲和素的磁性微球加入到超纯水中，并在室温下温育10 min，使捕获探针1结合到包裹链霉亲和素的磁性微球上；利用磁性分离，移除溶液中过量的捕获探针1，获得捕获探针1功能化的包裹链霉亲和素的磁性微球；捕获探针1：磁性微球：超纯水溶液的配比为1 μL：1 μL：10 μL；

所述纳米金颗粒的制备方法，包括以下步骤：将捕获探针2与报道探针溶于1×Tris-EDTA缓冲液中，制备储备溶液；将0.5 mg/mL的纳米金颗粒、1 μmol/L的捕获探针2和1 μmol/L的报道探针加入超纯水中，并在室温下温育10 min，通过生物素-链霉亲和素相互作用，形成捕获探针2与报道探针功能化的纳米金颗粒；纳米金颗粒：捕获探针2：报道探针：超纯水的配比为1 μL：0.45 μL：4.05 μL：1200 μL。

3.如权利要求1所述试剂盒或权利要求2所述纳米传感器，其特征在于，检测方法包括以下步骤：

（1）靶标HTLV-II DNA与磁性微球上修饰的捕获探针1部分杂交以形成具有突出靶标HTLV-II DNA的3'末端序列的稳定dsDNA双链体；加入末端脱氧核苷酸转移酶，以3'末端DNA序列为引物，引发第一步聚合延伸反应，得到富含胸腺嘧啶的聚合产物；

（2）加入修饰了捕获探针2和报道探针的纳米金颗粒，其将通过捕获探针2与所述富含胸腺嘧啶的聚合产物互补结合而大量地聚合，以纳米金颗粒上的报道探针为引物，脱氧核酸末端转移酶将引发第二步聚合延伸反应，生成富含鸟嘌呤产物；

（3）加入血红素，所述富含鸟嘌呤产物折叠成空间G-四联体结构，并催化过氧化氢介导的鲁米诺的氧化反应，通过检测化学发光信号检测确定HTLV-II DNA的含量。