[发明专利]一种用于诊断儿童巨细胞病毒感染的试剂

说明书

本发明公开了一种用于诊断儿童巨细胞病毒感染的试剂，包含患者的尿液，所述尿液经2500r/min离心8‑10min，以去除细胞碎片，收集上清液，由于尿液中含有PCR抑制剂，则用聚乙二醇进行预处理，50μl尿上清与50μl 20％聚乙二醇和25μl 2mol/L NaCl混合，置冰浴中5‑6h；15000r/min离心25‑30min收集沉淀；再于6400r/min离心2‑3min；尽可能吸去上清，将沉淀悬浮于蒸馏水中；该悬液可直接用于PCR扩增；扩增时应于100℃加热8‑10min，迅速置冰浴中冷却即可；本发明通过采集患者的尿液作标本，从临床标本中分离出病毒，抗体呈4倍以上增加或持续抗体滴度升高，有助于提高诊断效果。

技术领域

本发明涉及的是巨细胞病毒技术领域，具体的说是一种用于诊断儿童巨细胞病毒感染的试剂。

背景技术

巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)属于孢疹病毒科，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒，可引起人类巨细胞病毒感染。巨细胞病毒在人群中普遍易感，尤其是一些儿童和新生儿，通常无明显症状，潜伏在宿主细胞中，为隐性感染，而在免疫功能低下或缺陷时，常呈激发感染(显性感染)，病毒可侵袭多个器官和系统，引起严重疾病，严重者可致死亡。因此，早期监测HCMV潜伏、激活感染状态，对于免疫功能低下患者至关重要。

然而由于HCMV病毒在人体内感染的普遍存在，通常潜伏在宿主细胞中不引起明显症状，给HCMV激活感染的诊断带来很大困难。

目前HCMV感染诊断的方法是：

1、血清学检测抗体：特异性抗体检测主要是检测HCMV感染后刺激机体产生的抗巨细胞病毒IgM和IgG抗体。抗HCMVIgG抗体多份血清检测可用于HCMV临床诊断，血清IgG抗体阳性转化表明是原发感染，而连续监测IgG滴度急剧升高表明存在HCMV活动性感染，但是HCMV成人感染率极高，IgG大多数人为阳性，检测意义不大；血清抗HCMV特异性IgM抗体检测，因其抗体存在时间短，诊出阳性率较低，另外Bendiksen等[3]研究发现，IgM水平与病毒复制无关，因此IgM也不能潜伏、激发感染诊断的良好指标。

2、核酸杂交、原位杂交检测：目前对于HCMV的测序已经完成，大大促进了核酸杂交技术在HCMV诊断中的应用。采用该方法能直接在感染组织中发现包涵体，较传统的免疫组织化学方法更为灵敏、特异。但是由于方法学上的特殊性，完成全过程受诸多因素的影响，包括：标本处理时间，固定剂的选择，单克隆抗体细胞株的特异性等，另外该方法对镜检人员技术要求较高，方法上难以实现高通量检测，抗污染能力不强，成本过高，目前难以普及。

综上所述，目前还没有便捷的、明确的方法明显的区分HCMV的潜伏、激发感染。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种用于诊断儿童巨细胞病毒感染的试剂，从临床标本中分离出病毒，抗体呈4倍以上增加或持续抗体滴度升高，有助于提高诊断效果。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种用于诊断儿童巨细胞病毒感染的试剂，包含患者的尿液，所述尿液经2500r/min离心8-10min，以去除细胞碎片，收集上清液，由于尿液中含有PCR抑制剂，则用聚乙二醇进行预处理，50μl尿上清与50μl 20％聚乙二醇和25μl 2mol/L NaCl混合，置冰浴中5-6h；15000r/min离心25-30min收集沉淀；再于6400r/min离心2-3min；尽可能吸去上清，将沉淀悬浮于蒸馏水中；该悬液可直接用于PCR扩增；扩增时应于100℃加热8-10min，迅速置冰浴中冷却即可。

采用上述结构后，本发明的有益效果为：本发明通过采集患者的尿液作标本，从临床标本中分离出病毒，抗体呈4倍以上增加或持续抗体滴度升高，有助于提高诊断效果。

具体实施方式