[发明专利]一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法

权利要求书

1.一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：该含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法的具体制备步骤如下：

S1：提纯间充质干细胞因子冻干粉：提纯包括选取培植对象并清理、清理后的组织进行传代培养、获取传代培养的上清液和上清液浓缩的步骤；

(1)：选取培植对象并清理：选取脐带、结缔组织或者骨髓组织中的一种或几种作为培植对象，将选取的培植对象剪成碎粒，碎粒状的培植对象置于培养瓶中，培养瓶经过灭菌、消毒处理，培养瓶内存有30％的胎牛血清、2％的胶原蛋白酶，静置20分钟后，对培养瓶进行振荡处理，振荡频率30Hz，振荡时间为3-5分钟，将振荡后的培养瓶内的培养液以及培植对象通过60目的过滤筛进行过滤，保留过滤后残留物，残留物为清理后的培植对象；

(2)：清理后的组织进行传代培养：将(1)中的残留物加入培养皿中，并在培养皿中预存培养液，培养液采用生理盐水、0.1％-0.125％的蛋白酶、鸡蛋清，将组织细胞培养至8-10代时，将该培养瓶内的组织细胞以及培养液进行离心处理；

(3)：获取传代培养的上清液：通过(2)离心静置后获取上清液；

(4)：上清液浓缩：将(3)内的上清液再次离心，去除离心产生的上清液，保留下部分；

S2：选取细胞因子冻干粉配剂：选取5份人体半乳糖、3份甘油、0.1份消化酶作为细胞因子冻干粉配剂的原料，并将细胞因子冻干粉配剂的原料均匀混合；

S3：将细胞因子冻干粉与配剂混合、保存：将细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液混合，在混合的过程中加入生理盐水，生理盐水的比重按照质量比为细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液总质量的(2-2.2)倍，混合后低温存储。

2.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述培植对象剪成碎粒的直径尺寸为2mm-4mm。

3.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的培养瓶灭菌采用甲醛高温蒸汽灭菌，且培养瓶经过7天以上的静置处理。

4.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的(1)的振荡采用绕圈的方式振荡。

5.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的(2)的蛋白酶为端肽酶。

6.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的(4)中保留的下部分通过渗透膜过滤，并保留过滤后的滤物，所述渗透膜的规格选取为≤0.2μm。

7.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中在将细胞因子冻干粉配剂原料顺序为：人体半乳糖与甘油混合，之后将消化酶融入混合的人体半乳糖与甘油中。

8.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中细胞因子冻干粉配剂与上清液在加热的过程中混合，加热的温度为20℃-25℃。

9.根据权利要求1所述的一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中细胞因子冻干粉与配剂混合后的存储温度为2℃-4℃。