[发明专利]一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法

说明书

本发明公开的属于生物技术领域，具体为一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，该含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法的具体制备步骤如下：S1：提纯间充质干细胞因子冻干粉：提纯包括选取培植对象并清理、清理后的组织进行传代培养、获取传代培养的上清液和上清液浓缩的步骤；S2：选取细胞因子冻干粉配剂；S3：将细胞因子冻干粉与配剂混合、保存，本方案通过简化实验提取步骤，提高提取效率，通过离心浓缩等方案进行组织处理，保持细胞的活性，提供细胞因子需要的营养成分。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法。

背景技术

间充质干细胞是指具有三胚层分化潜能的一类干细胞亚群，在特定环境下，理论上可以诱导分化为人体任何一种组织细胞，主要来源于人体中广泛存在的间质组织，特别是骨髓、脂肪、脐带和胎盘等，由于其具有强大的增殖能力，较强的分化能力，低免疫原性和免疫调节功能，其在临床上的应用价值越来越受人们关注。随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌因子已成为研究的热点。间充质干细胞可以分泌多种细胞因子，这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。

同时干细胞内部含有大量的生物活性物质，已报道的干细胞裂解液中包含血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、IL-6与IL-7、巨核细胞集落刺激因、肿瘤坏死因子、干扰素等因子、脱氧核糖核酸及核糖核酸、活性多肽、以及免疫蛋白IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等，这些物质可以促进机体干细胞生长、增殖，起到活化干细胞作用。

细胞因子和活性物质添加到美容化妆品，不仅具有保湿美白功效，还能够修复受损皮肤，消除皮肤皱纹，收缩毛孔，改善面色。原有的制备方式效率较低、容易造成间充质干细胞因子的活性下降，为此，我们提出了一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，以解决上述背景技术中提出的原有的制备方式效率较低、容易造成间充质干细胞因子的活性下降的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，该含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法的具体制备步骤如下：

S1：提纯间充质干细胞因子冻干粉：提纯包括选取培植对象并清理、清理后的组织进行传代培养、获取传代培养的上清液和上清液浓缩的步骤；

(1)：选取培植对象并清理：选取脐带、结缔组织或者骨髓组织中的一种或几种作为培植对象，将选取的培植对象剪成碎粒，碎粒状的培植对象置于培养瓶中，培养瓶经过灭菌、消毒处理，培养瓶内存有30％的胎牛血清、2％的胶原蛋白酶，静置20分钟后，对培养瓶进行振荡处理，振荡频率30Hz，振荡时间为3-5分钟，将振荡后的培养瓶内的培养液以及培植对象通过60目的过滤筛进行过滤，保留过滤后残留物，残留物为清理后的培植对象；

(2)：清理后的组织进行传代培养：将(1)中的残留物加入培养皿中，并在培养皿中预存培养液，培养液采用生理盐水、0.1％-0.125％的蛋白酶、鸡蛋清，将组织细胞培养至8-10代时，将该培养瓶内的组织细胞以及培养液进行离心处理；

(3)：获取传代培养的上清液：通过(2)离心静置后获取上清液；

(4)：上清液浓缩：将(3)内的上清液再次离心，去除离心产生的上清液，保留下部分；

S2：选取细胞因子冻干粉配剂：选取5份人体半乳糖、3份甘油、0.1份消化酶作为细胞因子冻干粉配剂的原料，并将细胞因子冻干粉配剂的原料均匀混合；

S3：将细胞因子冻干粉与配剂混合、保存：将细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液混合，在混合的过程中加入生理盐水，生理盐水的比重按照质量比为细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液总质量的(2-2.2)倍，混合后低温存储。