[发明专利]一种免疫传感器及其制备与应用

权利要求书

1.一种用于检测PDGF-BB蛋白的蛋白免疫传感器，其特征在于：所述蛋白免疫传感器包括邻位连接核酸适配体亲和探针和熵信标复合物，所述邻位连接核酸适配体亲和探针包括Apt-P1和Apt-P2，所述Apt-P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

单直下划线标记标记为1域，所述Apt-P1的1域碱基数为5nt；

所述Apt-P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-GCCCTTACTCCGTCACTTTTTTTTTTTTTTTCAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’；

所述熵信标复合物包括reporter链、quencher链、byproduct链；所述reporter链的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述quencher链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述byproduct链的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的蛋白免疫传感器，其特征在于：所述熵信标复合物中reporter链、quencher链、byproduct链的摩尔比为1:1:1.2。

3.根据权利要求1-2任意一项所述蛋白免疫传感器在制备用于检测PDGF-BB蛋白的试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：用于检测PDGF-BB蛋白，包括以下步骤：

1)制备熵信标复合物：将Reporter链、Byproduct链与Quencher链混合，变性处理后，缓慢冷却至室温，室温下杂交，制得所述熵信标复合物；

2)邻位连接：将核酸适配体亲和探针Apt-P1与Apt-P2变性处理，缓慢冷却至室温，加入靶蛋白，在反应体系内孵育，形成邻位连接复合物；

3)将所述邻位连接复合物、熵信标复合物、燃烧链混合反应，待反应完毕，用荧光分光光度计检测其荧光强度。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述步骤1)中，混合物在1×TAE/Mg²⁺缓冲液中通过程序控温形成杂交复合物，所述Reporter、Byproduct链、Quencher链在体系中的终浓度为10μM；

所述步骤2)中，所述核酸适配体亲和探针Apt-P1与Apt-P2的摩尔比为1:1；

所述步骤2)中，孵育温度为4-50℃；

所述步骤3)中，熵信标复合物在体系中的浓度为50-500nM；

所述步骤3)中，所述燃烧链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述步骤3)中，反应时间为10-80min。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述步骤2)中，孵育温度为25-50℃；

所述步骤3)中，熵信标复合物在体系中的浓度为150-500nM；

所述步骤3)中，反应时间为25-80min。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述步骤2)中，孵育温度为25-40℃；

所述步骤3)中，熵信标复合物在体系中的浓度为250-300nM；

所述步骤3)中，反应时间为45-60min。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述步骤2)中，孵育温度为37℃；

所述步骤3)中，熵信标复合物在体系中的浓度为250nM；

所述步骤3)中，反应时间为45min。