[发明专利]一种免疫传感器及其制备与应用

说明书

本发明提供一种免疫传感器及其制备与应用，其中包括一对基于邻位连接的核酸适配体亲和探针Apt‑P1和Apt‑P2，所述Apt‑P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Apt‑P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的邻位连接探针通过内部碱基转移可以增加反应速度，降低背景信号，在该设计下信噪比最高。核酸适配体替代抗体作为亲和探针，节省了常规抗体所需成本，简化了常规抗体制备及储存所需的苛刻条件。本发明通过改良的邻位连接诱导的熵驱动信号放大策略，实现了对PDGF‑BB的高灵敏及高特异性检测。该检测方法简便，无需昂贵仪器，只需常规荧光分光光度计便可检测，降低检测成本。

技术领域

本发明涉及传感器领域，尤其涉及一种免疫传感器及其制备与应用。

背景技术

血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是一种多肽生长因子，不仅可以促进血管生成，还可促进多种细胞有丝分裂，主要有3种存在形式(PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB)。其中PDGF-BB可与PDGF受体α和β高亲和力结合，其促增殖作用相比于其他亚型更强。研究证实，PDGF-BB可以促进多种结缔组织细胞的生长与分化，其与多种疾病相关，如动脉粥样硬化、纤维化病症、恶性肿瘤等。因此，PDGF-BB蛋白作为一类经典的生物标志物，对临床分子诊断、疾病的治疗预后具有极其重要的作用。目前，常规的蛋白检测方法主要基于相应的生物抗体，有酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot及免疫PCR(Immuno-polymerase chain reaction,ImmunoPCR)。虽然这些方法能在一定程度上满足临床检测及诊断所需，但是它们都存在一定的不足，如均需要抗体易失活、价格昂贵、操作步骤繁琐、耗时长。因此，发展一种简单、快速、实用、灵敏的蛋白检测新技术对于阐明肿瘤发生发展的机制，早期诊断和早期治疗及探寻新的肿瘤治疗靶点具有重要价值。

近年来，随着DNA碱基互补配对杂交的不断深入研究，DNA纳米技术在多方面都展现出其不可比拟的优势，如逻辑门操作、生物标志物的检测，以及临床疾病的早期诊断。相比于传统的蛋白检测技术，基于DNA纳米技术的蛋白检测新方法具有反应过程可控、易于合成、快速、稳定性好、灵敏度高等优点。邻位连接技术是一种基于DNA邻位自组装的新方法，其通过一对核酸适配体亲和探针特异性识别靶蛋白，将蛋白的检测转换为核酸检测，具有简便、均相、价廉等优点。研究证明，邻位连接技术可级联各种信号放大策略，如：杂交链反应(hybridization chain reaction,HCR)、催化茎环自组装(catalytic hairpinassembly,CHA)、toehold介导的链置换反应(toehold-mediated strand displacementreaction,TSDR)、熵驱动(Entropy-driven amplification circuits，EDC)，从而保证了蛋白的高灵敏、高特异性检测。其中，熵驱动是链替代置换反应发展史上的一个里程碑，其不需要设计复杂的茎环探针，具有简便、快速、低背景、高信噪比等特点。但是，目前已发展的邻位连接技术由于存在不可预期的中间反应复合体，因此，其存在不依赖于toehold介导的信号泄露。同时，由于邻位连接的转化速率主要依赖于亲和探针识别靶蛋白形成的缺口引物与信号探针之间的链迁移速度，因此，缺口引物的设计对邻位转化速率至关重要。然而，现有的邻位连接技术大多存在反应速率慢、背景信号大等缺点，亟待发展新方法以弥补现有技术的不足，为蛋白的高灵敏、高特异性检测提供新思路。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种免疫传感器及其制备与应用，用于解决现有技术中PDGF-BB蛋白检测时反应速率慢、背景信号大等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种用于检测PDGF-BB蛋白的邻位连接核酸适配体亲和探针，包括Apt-P1和Apt-P2，所述Apt-P1的核苷酸序列为(SEQ ID NO.1)，所述Apt-P2的核苷酸序列为(SEQ IDNO.2)。