[发明专利]基于RNA靶标SAT淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法

权利要求书

1.一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤一，采用特异性靶标捕获技术，即磁珠法提取纯净的细胞靶核酸，即RNA作为靶标；

步骤二，采用RNA实时荧光恒温扩增检测技术得到淋病奈瑟菌感染的检测结果，所述RNA实时荧光恒温扩增检测技术使用反转录酶、RNA多聚酶和优化探针同时实现；

步骤三，结合阳性对照和阴性对照对所述检测结果进行判定。

2.根据权利要求1所述的一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于所述步骤一包括：

(1-1)手工提取靶标核酸特异性：包括在磁珠微粒表面标记oligo(dT)，在该段oligo(dT)上连接带有一段oligo(dA)的特异性的核酸捕获片段，当捕获探针与靶标核酸结合后，用磁铁吸附磁珠，即可提取靶标核酸特异性；

(1-2)获取纯净的细菌靶核酸，即RNA做为靶标：包括在核酸提取的过程中，病原体裂解释放出的核酸与核酸提取液中的磁性颗粒特异结合，清洗磁性颗粒获得纯净的细菌靶核酸RNA，最大限度的将样本中的杂质去除掉，保证反应时的特异性。

3.根据权利要求1所述的一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于所述步骤二包括：

(2-1)反转录酶为M-MLV反转录酶，产生靶标核酸RNA的一个DNA拷贝；

(2-2)RNA多聚酶为T7RNA多聚酶，从DNA拷贝上产生多个RNA拷贝；

(2-3)将带有荧光标记的优化探针和所述步骤一提取的RNA拷贝特异结合，从而产生荧光，所述荧光信号由检测仪器捕获，根据实时获得的所述荧光信号的出现时间和强度得到淋病奈瑟菌感染的检测结果。

4.根据权利要求1所述的一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于所述步骤三结合阳性对照和阴性对照对所述检测结果进行判定包括：应用临界弱阳性对照进行实验室质控，所设置的阳性对照、临界弱阳性对照和阴性对照的dt应满足：阳性对照dt≦临界弱阳性对照dt≦35，阴性对照dt无数值，或者为40，否则试验视为无效，重新进行，其中dt表示样本曲线与阈值曲线交点的横坐标读数。

5.根据权利要求2所述的一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于所述步骤(1-1)手工提取靶标特异性以及步骤(1-2)获取纯净的细菌靶核酸使用到磁珠分离器、电动吸引器、干式恒温仪和连续微量加样器完成。

6.根据权利要求2所述的一种基于RNA靶标的SAT的淋病奈瑟菌感染分子生物学检测方法，其特征在于所述步骤(1-1)手工提取靶标特异性以及步骤(1-2)获取纯净的细菌靶核酸还可以通过MagX全自动核酸提取仪完成所有的提取过程，提取出来的核酸在荧光PCR仪器上进行扩增检测。