[发明专利]基于微流控芯片检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片的检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括有主动控制流路的多通量微流控核酸检测芯片、预装干粉检测试剂和阳性质控品；所述预装干粉检测试剂含有鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的特异性保守序列的引物及TaqMan荧光探针；

其中，特异性保守序列的引物序列为：

鼻病毒，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

呼吸道合胞病毒，SEQ ID NO.4 和SEQ ID NO.5；

副流感病毒，SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；

特异性TaqMan探针序列为：

鼻病毒，SEQ ID NO.3；

呼吸道合胞病毒，SEQ ID NO.6；

副流感病毒，SEQ ID NO.9；

所述预装干粉检测试剂还包括有PCR缓冲液、海藻糖、牛血清白蛋白、dATP、dUTP、dCTP、dGTP，MgCl₂、HotStart Taq酶、逆转录酶和UNG酶；

所述引物在扩增体系中的终浓度为100nM；所述探针在扩增体系中的终浓度为50nM；所述海藻糖在扩增体系中的终浓度为1%w/v；所述牛血清白蛋白在扩增体系中的终浓度为0.2%w/v；所述HotStart Taq酶、逆转录酶、UNG酶在扩增体系中的终浓度为1U；所述dATP、dUTP、dCTP、dGTP在扩增体系中的终浓度均为0.5mM；所述MgCl₂在扩增体系中的终浓度为5.5mM；

所述阳性质控品中含有鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的扩增基因序列的质粒；

所述预装干粉检测试剂的制备方法为：

（1）将配制好的检测试剂溶液以单人份分装到PCR管中，放入-80℃条件下冻存8h以上；（2）将冻好的检测试剂放入到真空冷冻干燥机中，设定冻干机程序为：

-50℃，1h，1大气压；

-40℃，5h，＜10Pa；

-10℃，2h，＜10Pa；

0℃，2h，＜10Pa；

30℃，5h，＜10Pa；

（3）干燥完成后，取出试剂，即为干粉形态；

所述预装干粉检测试剂是预装在所述主动控制流路的多通量微流控核酸检测芯片中。

2.根据权利要求1所述的基于微流控芯片的检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述主动控制流路的多通量微流控核酸检测芯片具有微流控流道，包括一条出样主流道以及若干条分样流道；各分样流道分体设置，每个分样流道对应一个反应腔，能等分各个反应腔的试剂。