[发明专利]一种呋喃类代谢物半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用在审
申请号: | 201810456832.2 | 申请日: | 2018-05-14 |
公开(公告)号: | CN108530373A | 公开(公告)日: | 2018-09-14 |
发明(设计)人: | 李斌;石松;谢俊平;江林峰;凌家亮;石林花;任季玉 | 申请(专利权)人: | 广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司;广东达元食品药品安全技术有限公司;广州达元食品安全技术有限公司 |
主分类号: | C07D263/26 | 分类号: | C07D263/26;C07D233/80;C07C281/14;C07K14/76;C07K14/765;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/68 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 谭英强 |
地址: | 510535 广东省广州市高新技*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 半抗原 人工抗原 代谢物 呋喃 荧光定量 免疫层析 灵敏度 免疫层析试纸条 空间位置 免疫原性 特征结构 载体蛋白 待测物 识别位 试纸条 小分子 检测 抗原 效价 制备 应用 配合 | ||
1.一种呋喃类代谢物半抗原,其特征在于,呋喃类代谢物半抗原的结构通式为:
R基团的结构式为以下四种中的任意一种:
2.根据权利要求1所述的呋喃类代谢物半抗原,其特征在于:其制备方法包括以下步骤:
1)将化合物Ⅰ与化合物Ⅱ溶于丙酮,加入缚酸剂,在80~90℃反应2~5h,获得化合物Ⅲ;
2)将化合物Ⅲ溶于无水乙醇,加入6M氢氧化锂溶液至反应体系pH值为10~12,在室温反应15~26h,加入纯化水,加入1M稀盐酸至反应体系的pH值为4~5,过滤获得化合物Ⅳ;
3)将化合物Ⅳ溶解于甲醇中,加入X,60~70℃反应1.5~2.5h,反应完毕,过滤,得半抗原Ⅴ,X为AMOZ、AOZ、AHD、SEM中的任意一种;
式Ⅰ~Ⅴ如下:
3.根据权利要求2所述的呋喃类代谢物半抗原,其特征在于:步骤1)中,缚酸剂为K2CO3,缚酸剂与化合物Ⅱ的摩尔比为(1.5~2):1,化合物Ⅰ与化合物Ⅱ的摩尔比为(2~2.5):1。
4.根据权利要求2所述的呋喃类代谢物半抗原,其特征在于:步骤3)中加入的X与化合物Ⅳ的摩尔比为(2.0~3.0):1。
5.一种呋喃类代谢物人工抗原,为权利要求1~4任一项所述的呋喃类代谢物半抗原与载体蛋白偶联得到,呋喃类代谢物人工抗原的结构通式为:
载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白中的任意一种。
6.根据权利要求5所述的呋喃类代谢物人工抗原制备的呋喃类代谢物单克隆抗体,呋喃类代谢物人工抗原的载体蛋白为血蓝蛋白。
7.权利要求5所述的呋喃类代谢物人工抗原和权利要求6所述的呋喃类代谢物单克隆抗体在ELISA检测方法中的应用。
8.权利要求5所述的呋喃类代谢物人工抗原和权利要求6所述的呋喃类代谢物单克隆抗体在荧光定量免疫层析中的应用。
9.一种呋喃类代谢物荧光定量免疫层析试纸条,试纸条中包括包被有权利要求5所述的呋喃类代谢物人工抗原的反应膜,呋喃类代谢物人工抗原的载体蛋白为牛血清蛋白,其制备方法包括以下步骤:
1)制备包被有人工抗原和兔IGg的反应膜:将载体蛋白为牛血清蛋白的呋喃类代谢物人工抗原加到包被缓冲液中混合均匀喷到反应膜的检测区,将兔IGg加到包被缓冲液中混合均匀喷到反应膜的控制区,检测区和控制区相互分离,干燥处理后保存备用;
2)样品垫的制备:将裁剪好的空白样品垫浸泡在样品垫处理液中浸泡,取出样品垫干燥处理后保存备用;
3)荧光定量免疫层析试纸条的组装:在背衬中部叠置反应膜,两端分别叠置样品垫和吸水垫,反应膜和吸水垫、样品垫相搭连,检测区靠近样品垫,控制区靠近吸水垫,得到试纸板,将试纸条装载于试纸卡内,得荧光定量免疫层析试纸条。
10.一种使用权利要求9所述的呋喃类代谢物荧光定量免疫层析试纸条检测呋喃类代谢物的方法:
1)荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体的制备:将荧光微球活化后与权利要求6所述的呋喃类代谢物单克隆抗体偶联,离心除杂,加入荧光缓冲液重悬荧光微球,得到荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体;
2)荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体检测液的制备:用荧光缓冲液将荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体稀释,得到荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体检测液;
3)用PBS缓冲液配备系列浓度的呋喃类代谢物标准溶液,取荧光微球标记的呋喃类代谢物单克隆抗体检测液和标准溶液混匀后滴加到荧光定量免疫层析试纸条的样品区,用荧光定量检测仪读取T/C值,通过标准溶液浓度对应的T/C值建立标准曲线,测定待测样品的T/C值,结合标准曲线即可实现呋喃类代谢物的快速定量检测。
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