[发明专利]一种呋喃类代谢物半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用

说明书

本发明公开了一种呋喃类代谢物半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用，半抗原结构中有两个待测物的特征结构，使得半抗原在载体蛋白中的空间位置更加突出，增加了识别位点，有效的提高了小分子半抗原的免疫原性，也提高了抗原的效价。本发明中的人工抗原用于ELISA检测呋喃类代谢物具有很高的灵敏度。使用本发明中的人工抗原制备的荧光定量免疫层析试纸条配合本发明中的检测方法，可快速、便捷地实现呋喃类代谢物的检测，并且该试纸条灵敏度高、精密度高，稳定性好。

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，具体涉及一种呋喃类代谢物半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用。

背景技术

呋喃类是人工合成的一类共有5-硝基呋喃环结构的抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、部分真菌都具有抗菌效果。因价格低廉，被广泛地应用在畜禽和鱼类养殖中，用于治疗由沙门氏杆菌、大肠杆菌引起的肠炎，球虫病等，并且常作为畜牧动物以及水产鱼虾类的生长促进剂被添入饲料中。硝基呋喃类主要包括：呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，其代谢产物分别为AOZ、AMOZ、AHD、SEM，故常利用代谢物的检测来反应硝基呋喃类药物的残留状况。

在食品安全中，呋喃类药物的大量或连续使用不仅对养殖动物有毒性作用，而且具有致癌、致畸、致突变作用，其代谢物还对人类健康有恶性影响。因此，许多国家已经明令禁止在饲养动物源性食品过程中使用呋喃类药物，并规定了在动物源性食品中的检验检疫标准。

目前用于检测呋喃类代谢物的方法主要有传统检测方法，如分光光度法、高效液相色谱法及其联用技术等，以上方法虽然可以精确定量，但由于设备仪器昂贵，检测时间长，且需专业人员操作，因此无法实现真正意义上的现场快速检测；另一检测方法为免疫学检测技术，此方法具有高特异性和高选择性的特点，非常适用于复杂基质痕量组分的分离或检测，随着学科间的相互渗透，其检测方法层出不穷，免疫分析检测技术也在不断发展，从ELISA酶联免疫分析技术和胶体金免疫层析技术到生物传感器技术(如荧光免疫层析技术)。相比ELISA和胶体金技术而言，荧光免疫层析技术作为新的检测方法比前者具有巨大优势。现有的酶联免疫分析方法虽然灵敏度高、通量大，但也需专业人员操作，且检测时间较长，同样也无法满足现场快速筛查的需求；而胶体金法虽然具备高通量、操作简单、检测时间短和无需专业技术人员操作等优点，但其较差的灵敏度，也使得胶体金法无法满足国家检测标准的要求。而荧光免疫层析技术作为一种新的快速检测的定量方法，是基于免疫学原理和胶体金免疫层析技术发展起来的，该技术结合了ELISA法的高灵敏度和胶体金法的快速的特点，检测时间只需10～15min，但检测灵敏度是胶体金法的3～5倍，具有操作简便、高灵敏度、高通量和快速的特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种呋喃类代谢物半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种呋喃类代谢物半抗原，其特征在于，呋喃类代谢物半抗原的结构通式为：

R基团的结构式为以下四种中的任意一种：

呋喃类代谢物半抗原的制备方法包括以下步骤：

1)将化合物Ⅰ与化合物Ⅱ溶于丙酮，加入缚酸剂，在80～90℃反应2～5h，获得化合物Ⅲ；

2)将化合物Ⅲ溶于无水乙醇，加入6M氢氧化锂溶液至反应体系pH值为10～12，在室温反应15～26h，加入纯化水，加入1M稀盐酸至反应体系的pH值为4～5，过滤获得化合物Ⅳ；

3)将化合物Ⅳ溶解于甲醇中，加入X，60～70℃反应1.5～2.5h，反应完毕，过滤，得半抗原Ⅴ，X为AMOZ、AOZ、AHD、SEM中的任意一种；

式Ⅰ～Ⅴ如下：