[发明专利]肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒及制法

权利要求书

1.肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：肿瘤关联糖蛋白-72检测试纸条，所述肿瘤关联糖蛋白-72检测试纸条包含亚甲基蓝标肿瘤关联糖蛋白-72抗体垫(1)、样品垫(2)、C线(3)和T线(4)，所述C线(3)和T线(4)划线或点样于硝酸纤维素膜(5)上不同位置，所述硝酸纤维素膜(5)粘贴于底板(6)上，所述底板(6)一端粘贴加厚吸水纸(7)，所述底板(6)另一端粘贴有所述亚甲基蓝标记肿瘤关联糖蛋白-72抗体垫(1)和样品垫(2)，所述肿瘤关联糖蛋白-72检测试纸条还包含工作电极(8)、参比电极(9)、辅助电极(10)贴片贴合于硝酸纤维素膜上T线(4)抗体区。

2.根据权利要求1所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒还包括反应溶液，样本稀释溶液，清洗液。

3.根据权利要求1所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述亚甲基蓝偶联肿瘤关联糖蛋白-72抗体垫(1)由亚甲基蓝偶联肿瘤关联糖蛋白-72抗体、抗体垫结合稀释液和玻璃纤维素膜制成。

4.根据权利要求3所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述亚甲基蓝偶联肿瘤关联糖蛋白-72抗体中亚甲基蓝和肿瘤关联糖蛋白-72的摩尔比为5:1～50:1。

5.根据权利要求4所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述抗体垫结合稀释液包含：PBS、蔗糖、海藻糖、BSA、PVP、表面活性剂和NaN₃，所述PVP质量浓度范围：0.5％～10％，所述表面活性剂浓度范围：0.5％～5％。

6.根据权利要求6所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒，其特征在于，所述反应液包含：浓度为0.1～10mM三氯化六铵合钌、浓度为0.1～20mM三(2-羧乙基)膦盐酸盐。

7.肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒制备方法，其特征在于，方法包括如下步骤：

亚甲基蓝标肿瘤关联糖蛋白-72抗体垫的制备；

层析试纸条C线与T线的制备；

层析试纸条的组装。

8.根据权利要求8所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述亚甲基蓝标肿瘤关联糖蛋白-72(TAG-72)抗体垫的制备方法为：

将肿瘤关联糖蛋白-72抗体和DMSO溶解亚甲基蓝-琥珀酰亚胺酯加入3ml 0.02M MES(PH 8.0)，4℃轻轻摇晃过夜；标记抗体装入分子量10000D的透析袋，4℃在PBS溶液中透析4h，用截留分子量30000D的超滤管离心浓缩，用保存液收集，4℃保存；将保存的亚甲基蓝标记肿瘤关联糖蛋白-72抗体用垫结合稀释液按1：4稀释，铺于玻璃纤维素膜，真空干燥后密封保存。

9.根据权利要求8所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述层析试纸条C线与T线的制备方法为：将羊抗鼠IgG抗体稀释成1mg/ml、肿瘤关联糖蛋白-72鼠单克隆抗体稀释成1mg/ml别划线或点样于硝酸纤维素膜上不同位置，C线为羊抗鼠IgG线，T线为肿瘤关联糖蛋白-72鼠单克隆抗体线，于37度干燥2-3小时，密封保存。

10.根据权利要求8所述的肿瘤关联糖蛋白-72免疫层析电化学检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述层析试纸条的组装方法为：

将含C线、T线的硝酸纤维素膜粘贴于底板中间，底板一端粘贴加厚吸水纸，另一端粘贴上制作好的亚甲基蓝标记肿瘤关联糖蛋白-72抗体垫和样品垫，切条机切成所需大小试纸条，将工作电极、参比电极、辅助电极贴片贴合于NC膜T线肿瘤关联糖蛋白-72抗体区，压卡机压入塑料卡中，加入干燥剂，密封包装保存。