[发明专利]桂郁金PCR鉴定试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种桂郁金PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，所述试剂盒中的特异性引物为GYJ1和GYJ2：GYJ1：5’‑CTTCAACAACAGCACGACAA‑‑3'，GYJ2：5’‑GGTTAAGCAATCTCTTCGGA‑3’；本发明提供了一种快速、准确鉴定桂郁金的方法，可以广泛应用于桂郁金中药选种育种、种植、采收储存、销售、临床应用各环节的品种鉴定，在鉴别中药真伪，打击伪品，加强中药质量监管，促进中药现代化发展方面具有重大意义。

(一)技术领域

本发明涉及一种DNA分子鉴定方法，特别涉及中药桂郁金PCR鉴定试剂盒、特异性引物、模板及鉴定方法。

(二)背景技术

桂郁金为广西莪术(Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)的干燥块茎，道地产地为广西的横县和贵县等。郁金的其他品种还包括温郁金、黄丝郁金、桂郁金。郁金是一种传统中药，具有活血祛瘀的功效，用于治疗经闭痛经、胸腹胀痛、黄胆尿赤、癫痫发狂等疾病。近代研究表明郁金可以调节免疫功能、抗炎、抑制中枢神经、改善血液流动性等作用，亦可用于治疗癌症、胃炎、心脑血管疾病。不同的郁金品种，其有效成分和药效差别较大。由于郁金品种较多，来源多样，外观形态类似，单靠外形和传统中药检测方法较难区别，急需建立一种新型的鉴定方法。

本发明提供的PCR检测法是一种桂郁金的DNA分子鉴定方法，能够准确鉴定桂郁金。利用PCR检测法对桂郁金进行鉴定尚未见报道。该方法的建立对实现中药现代化，规范管理郁金的种植，采摘和销售，具有重要意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种能够准确鉴定中药桂郁金的PCR鉴定试剂盒和检测方法，包括PCR检测法关键试剂PCR引物、模板和PCR检测法的检测步骤。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种桂郁金PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物为GYJ1和GYJ2：

GYJ1:5’-CTTCAACAACAGCACGACAA-3’

GYJ2:5’-GCTCAACAAACCCAAATACG-3’。

进一步，所述的桂郁金PCR鉴定试剂盒的组成为：

本发明还涉及一种利用所述桂郁金PCR鉴定试剂盒对桂郁金进行鉴定的方法，所述方法为：

(1)模板DNA的提取和质量鉴定：采用常规提取法提取供试品DNA作为PCR的模板；以电泳法检测模板DNA的质量(检测方法同步骤(3))，条带清晰无弥散的，即为符合PCR反应的模板DNA；

(2)PCR鉴定：利用桂郁金PCR鉴定试剂盒中的特异性引物GYJ1和GYJ2，进行PCR扩增：

PCR反应溶液：

将PCR反应溶液放入PCR自动扩增仪器中进行PCR扩增反应，反应程序设置为：94℃预变性5min，94℃变性45s，50～58℃复性45s，72℃延伸1min，32个循环，最后72℃延伸10min；

(3)PCR产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物(即扩增反应后的反应液)5μL与加样缓冲液1μL混合，用1.2％琼脂糖凝胶电泳(含0.5％溴化乙锭)检测扩增结果，在1049bp处出现扩增条带的为桂郁金，在1049bp处不出现扩增条带的不是桂郁金。