[发明专利]一种抗体复合物的制备方法

权利要求书

1.一种C端-C端连接的二价抗体或双特异性抗体复合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)通过基因重组在抗体的C末端融合FGE识别氨基酸序列，通过体外加入FGE进行催化，得C末端定点醛基修饰的抗体；

(2)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得二价抗体复合物，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:0.4～1.2；

(3)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得单一同双官能接头连接的抗体，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:5～15；

(4)将步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体，在冰冻条件下反应，得双特异性抗体复合物，其中步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体的可变区不同。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)、步骤(3)以及步骤(4)中，所述的冰冻条件为-5℃～-30℃。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)、步骤(3)以及步骤(4)中，所述的在冰冻条件下反应是指在-5℃～-30℃下放置2～48h。

4.根据权利要求1～3的任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)、步骤(3)以及步骤(4)中，所述的在冰冻条件下反应的反应体系pH值为4.0～7.5。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述抗体为纳米抗体、单链抗体scFV或可变区抗体Fab。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的FGE识别氨基酸序列为含有半胱氨酸-X-脯氨酸-X-精氨酸，所述X为任意天然氨基酸。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)和步骤(3)中，所述的醛基反应性同双官能接头为R-L-R，其中R为包含氨基、酰肼基、氧氨基、苯肼基或吡啶肼基的醛基反应性基团，L为具有-(CH₂CH₂-O)n和/或-(O-CH₂CH₂)n作为构成单元的聚合物，其中，n为1至100的整数。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述FGE的基因编码序列来源于结核分枝杆菌或人类。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，将在冰冻条件下反应后的反应产物，通过体积排阻层析分离，得单一同双官能接头连接的抗体。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述的步骤(3)得到的抗体与C末端定点醛基修饰的抗体的摩尔比为1:1～3。