[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其培养方法

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞经由CD3单克隆抗体和Retronectin联合包被的细胞培养器材培养得到；

其中，所述CD3单克隆抗体的浓度为2-6μg/mL，所述Retronectin的浓度为16-24μg/mL。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CD3单克隆抗体的浓度为3-5μg/mL；

优选地，所述Retronectin的浓度为18-22μg/mL；

优选地，所述细胞培养器材包括：6孔板、12孔板、T25、T75或T175中的任意一种或至少两种的组合。

3.一种制备如权利要求1或2所述的嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将细胞培养器材用CD3单克隆抗体和Retronectin进行包被；

(2)抽取人体外周血，提取外周血单个核细胞并纯化得到CD3T细胞；

(3)将步骤(2)得到的T细胞接种于步骤(1)包被后的培养器材中，培养过夜后再用慢病毒感染过夜；

(4)将步骤(3)感染过夜的细胞吸去病毒液上清，更换培养液继续培养；

(5)将步骤(4)培养后的细胞进行杀伤实验，收集杀伤率大于合格值的细胞进行细胞制备及质控，得到权利要求1或2所述的嵌合抗原受体T细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述CD3单克隆抗体的浓度为2-6μg/mL；

优选地，步骤(1)所述Retronectin的浓度为16-24μg/mL。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述抽取的外周血体积为50-100mL；

优选地，步骤(2)所述纯化的方法为磁珠分选法。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述慢病毒为Pre-Lenti-EF1-MCS-CD19CAR病毒液，所述病毒液的MOI为10-15。

7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述更换的培养液的组分包括X-VIVO培养液、1000IΜ/mL IL-2和3％的自体血浆；

优选地，步骤(5)所述杀伤率合格值为90％；

优选地，步骤(5)所述质控包括细菌、真菌和内毒素检测。

8.根据权利要求3-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞的培养周期为6-9天，优选为7-8天。

9.一种制备如权利要求1或2所述嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)将细胞培养器材用2-6μg/mL的CD3单克隆抗体和16-24μg/mL的Retronectin进行包被；

(2)抽取50-100mL的人体外周血，提取外周血单个核细胞并采用磁珠纯化法纯化得到CD3T细胞；

(3)将步骤(2)得到的T细胞接种于步骤(1)包被后的培养器材中，培养过夜后再用MOI为10-15的Pre-Lenti-EF1-MCS-CD19CAR病毒液感染过夜；

(4)将步骤(3)感染过夜的细胞吸去病毒液上清，更换包括X-VIVO培养液、1000IΜ/mLIL-2和3％的自体血浆的培养液继续培养；

(5)将步骤(4)培养后的细胞进行杀伤实验，收集杀伤率大于90％的细胞进行细胞制备及质控，得到所述的嵌合抗原受体T细胞。

10.一种如权利要求1或2所述的嵌合抗原受体T细胞用于制备CAR-T细胞免疫治疗的药物。