[发明专利]一种快速高效获得非转基因的定向基因突变植物的方法和应用

权利要求书

1.一种用于创制定向基因突变的非转基因植株的方法，其特征包括：

a)对定向基因突变的植物通过引入外源核酸分子实施转基因；

b)实施转基因方法包括向定向基因突变的植物引入构建体，所述构建体含有第一核酸分子和第二核酸分子，其中第一核酸分子作为基因编辑元件，第二核酸分子作为致死或停止发育元件，其中第二核酸分子选自基因元件A，或基因元件C构成的组；其中基因元件A为导致受精卵或胚致死或停止发育的基因元件；基因元件C为基因元件D和基因元件A的组合元件，其中基因元件D为导致雄性配子细胞或花粉致死或停止发育的基因元件，

所述基因元件A的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述基因元件D的核苷酸序列如SEQID NO：4所示。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述的第一核酸分子为可以编辑核酸的基因元件。

3.如权利要求2 所述的方法，其中可以编辑核酸的基因元件选自任意一种基因编辑系统的基因元件构成的组。

4.如权利要求3所述的方法，所述的基因编辑系统，选自ZFN基因编辑系统，TALEN基因编辑系统，CRISPR/CAS9基因编辑系统或CRISPR/CPF1基因编辑系统。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述的CRISPR/CAS9基因编辑系统的基因元件包括CAS9基因和sgRNA基因；其中：所述的CAS9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述的sgRNA基因的核心骨架的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。