[发明专利]一种简便快速检测牡蛎倍性的方法在审
| 申请号： | 201810465575.9 | 申请日： | 2018-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN108931468A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 李永国;李琪;于瑞海 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | G01N15/14 | 分类号： | G01N15/14;A61B10/02 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 刘艳青 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牡蛎 血淋巴 闭壳肌 倍性 倍性检测 快速检测 抽取 多倍体 一次性注射器 多倍体育种 流式细胞仪 生活环境 无水乙醇 边缘处 尖嘴钳 上清液 碎贝壳 染色 活体 过滤 悬浮 致死 研究 检测 制约 | ||
1.一种简便快速检测牡蛎倍性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）在待检测的牡蛎两壳间靠近闭壳肌的边缘处，使贝壳边缘形成缝隙，缝隙的长度要便于插入注射器和确定闭壳肌的位置；
（2）根据倍性检测需要和降低对检测样品刺激的原则，抽取闭壳肌血淋巴窦内的血淋巴；
（3）将抽取的血淋巴滴入到无水乙醇中进行固定，放置后，使血淋巴细胞固定完全；
（4）将固定的血淋巴细胞离心去掉上清液；
（5）重新悬浮得到悬浮液，并去除RNA干扰；
（6）染色；
（7）检测倍性。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中用尖嘴钳捏碎贝壳边缘形成一条2~3㎜的缝隙。
3.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（2）具体为，用1.5 mL的一次性注射器插入闭壳肌血淋巴窦内抽取血淋巴，抽取100~200 mL。
4.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为，将抽取的血淋巴逐滴滴入到-20℃预冷的无水乙醇中进行固定，乙醇最终浓度为75%，然后4℃放置一段时间，使血淋巴细胞固定完全。
5.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（4）中，离心力不超过300
6.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（5）具体为，加入1 mL磷酸盐缓冲液重新悬浮，再加入1 g RNA酶A 反应30 min，去除RNA，以避免RNA干扰。
7.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（6）具体为：所述向悬浮液中加入35 g 碘化丙啶，染色30 min。
8.如权利要求1所述的所述方法，其特征在于，所述步骤（7）具体为：所述经300目筛绢过滤后，流式细胞仪检测DNA含量，以确定倍性。
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