[发明专利]一种用于提取沉香高质量DNA的方法

权利要求书

1.一种用于提取沉香高质量DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）沉香样品消毒，除杂，充氮，磨成沉香粉末；

（2）向步骤（1）所得样品中加入3%鞣酸溶液，摇匀，静置，加入壳聚糖，摇匀，静置，再加5-10 μL/mg的DNA提取液，混匀后50-65 ℃水浴温浴3-8 h，室温冷却，再加入等体积的DNA分离液，混匀，离心，收集上清液；

（3）向上清液中加入2倍体积的预冷DNA沉淀液，抽吸混匀，-20 ℃静置沉淀12-18 h；

（4）室温冷却，加入等体积的DNA洗涤液，冰浴5-10min后转移至DNA吸附柱中，离心，弃去废液；

（5）向步骤（4）的DNA吸附柱中加入70-80%乙醇溶液，离心，弃去废液；

（6）使步骤（5）的DNA吸附柱中的溶剂挥发后，加入预热的DNA溶解液，离心，取上清，即得沉香总DNA；

（7）将步骤（6）所得DNA作为模板DNA，加入到PCR反应体系，定向扩增得到DNA目的片段；

离心工作温度为4-20 ℃，离心速率4500-12000 rpm，时间1-20 min；

步骤（4）、（5）和（6）重复操作1-2次；

所述的DNA提取液由3% CTAB、100 mM Tris-Hcl、2 mM EDTA、1.4 mM NaCl、1% PVP-40、0.3 M PTB、10 mg/mL蛋白酶K及β-巯基乙醇组成；

所述的DNA分离液为24:1的氯仿-异戊醇；

所述的DNA沉淀液为异丙醇或无水乙醇；

所述的DNA洗涤液包括5-8 M的乙酸铵；

所述的DNA溶解液为水或TE液。

2.根据权利要求1所述的提取沉香高质量DNA的方法，其特征在于，所述的沉香样品为任何含有沉香DNA的样品。

3.根据权利要求2所述的提取沉香高质量DNA的方法，其特征在于，所述的沉香样品为沉香木、沉香属植物组织、沉香深加工产品或沉香深加工残留物中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的提取沉香高质量DNA的方法，其特征在于，

步骤（7）PCR扩增反应条件为：94-95 ℃预变性0.4-5 min；94 ℃变性0.4-1 min，50-56℃退火0.5-1min，72℃延伸0.5-2 min，35-55次循环；72 ℃延伸5-20 min；4 ℃保温；

PCR反应体系为：总体积为15-50 μL，2×Easy Taq PCR SuperMix 10-15 μL、10-100mM引物 1-2 μL、5-1200 ng的DNA模板，余量为dd H2O。

5.根据权利要求1所述的提取沉香高质量DNA的方法，其特征在于，温浴温度为60-65℃，反应时间为1-2 h；然后降温至50-60℃，反应时间1-2h；再升温至65℃，反应1-5h。