[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法

权利要求书

1.一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于，所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基由以下重量百分比的原料组成：

糖蜜4-8％，酵母膏0.05-1％，尿素0.05-1％，磷酸氢二钾0.05-1.5％，无水乙酸钠0.05-3％，碳酸钙0.005-0.5％，硫酸镁0.005-0.05％，硫酸锰0.001-0.05％，氯化铁0.001-0.05％，麦芽汁2-8％，玉米浆2-5％，其余为无菌水；

所述苏云金芽孢杆菌的培养发酵方法包括如下步骤：

(1)将苏云金芽孢杆菌种在无菌条件下接种于斜面培养基中，进行斜面培养，控制培养温度为30-32℃，培养12-48h，得到斜面苏云金芽孢杆菌种；

(2)将步骤(1)的斜面苏云金芽孢杆菌种在无菌条件下接种于扩大培养基中，置于100-200rpm的摇床中培养12-24h，控制培养温度为30-35℃，得到苏云金芽孢杆菌种子液；

(3)将所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基的原料按重量百分比混合后，加热使物料充分溶解于水中，进行灭菌处理，然后冷却该物料至温度为40℃以下，得到苏云金芽孢杆菌的液体培养基；

(4)将发酵罐在0.08-0.15Mpa的压力下使用115-125℃的蒸汽进行灭菌10-30min；放入步骤(3)的苏云金芽孢杆菌液体培养基，再将步骤(2)的苏云金芽孢杆菌种子液添加进苏云金芽孢杆菌液体培养基中接种，进行培养发酵，发酵时控制发酵物料的pH值为7.5-8.4，发酵温度为35-39℃，发酵时间为36-60h，发酵结束后离心处理，取上清液，得到苏云金芽孢杆菌发酵液。

2.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于，所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基由以下重量百分比的原料组成：糖蜜5-6％，酵母膏0.3-0.6％，尿素0.3-0.7％，磷酸氢二钾0.5-1％，无水乙酸钠1-2％，碳酸钙0.05-0.3％，硫酸镁0.01-0.02％，硫酸锰0.008-0.01％，氯化铁0.01-0.03％，麦芽汁3-6％，玉米浆3-4％，其余为无菌水。

3.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于：步骤(4)中将苏云金芽孢杆菌种子液添加进苏云金芽孢杆菌液体培养基中接种时，苏云金芽孢杆菌种子液的添加量为苏云金芽孢杆菌液体培养基体积的1.5-5％。

4.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于：步骤(1)所述的斜面培养基为PDA-葡萄糖培养基或牛肉膏蛋白胨培养基。

5.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于：步骤(2)所述的扩大培养基由如下重量百分比的原料组成：糖蜜3-10％，酵母膏0.04-1.5％，尿素0.03-1.5％，磷酸氢二钾0.01-2％，无水乙酸钠0.01-3.5％，碳酸钙0.002-0.7％，硫酸镁0.002-0.5％，硫酸锰0.001-0.1％，氯化铁0.001-0.1％，其余为无菌水。

6.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于：所述步骤(4)进行进行苏云金芽孢杆菌的发酵培养时向发酵罐通入无菌空气，通入量为1.5-2.0VVM。

7.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，其特征在于：步骤(4)所述的苏云金芽孢杆菌发酵液中苏云金芽孢杆菌活菌数为1.5-2.5x10⁹cfu/mL。