[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法

说明书

本发明公开一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，所述液体培养基由如下原料组成：糖蜜，酵母膏，尿素，磷酸氢二钾，无水乙酸钠，碳酸钙，硫酸镁，硫酸锰，氯化铁，麦芽汁，玉米浆，无菌水；本发明还提供了利用所述液体培养基培养发酵苏云金芽孢杆菌的方法；本发明的苏云金芽孢杆菌的液体培养基成本低廉，培养方法操作简单，克服了传统的苏云金芽孢杆菌培养基成本高、不宜大规模生产、生产操作过于复杂的缺点，其成分简单，方便制备，培养的苏云金芽孢杆菌活菌含量高，达到2.5x10⁹cfu/mL，且杂菌含量低，稳定性较好，便于长途运输和长期保存。

技术领域

本发明涉及微生物领域技术领域，更具体的涉及一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法。

背景技术

苏云金杆菌，简称Bt，是包括许多变种的一类产晶体芽孢杆菌。可做微生物源低毒杀虫剂，以胃毒作用为主。该菌可产生两大类毒素，即内毒素(伴胞晶体)和外毒素，使害虫停止取食，最后害虫因饥饿和中毒死亡。因此该杆菌可做微生物源低毒杀虫剂，用于防治直翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目，特别是鳞翅目的多种害虫，而对非目标生物安全。

而外毒素作用缓慢，在蜕皮和变态时作用明显，这两个时期是RNA合成的高峰期，外毒素能抑制依赖于DNA的RNA聚合酶。该药作用缓慢，害虫取食后2天左右才能见效，持效期约1天，因此使用时应比常规化学药剂提前2-3天，且在害虫低龄期使用效果较好。对鱼类、蜜蜂安全，但对家蚕高毒。

因此，Bt杀虫剂具有专一、高效和对人畜安全等优点。目前苏云金杆菌商品制剂已达100多种，是世界上应用最为广泛、用量最大、效果最好的微生物杀虫剂，因而倍受人们关注。但是，商品Bt制剂在生产防治中也显示出某些局限性，如速效性差、对高龄幼虫不敏感、田间持效期短以及重组工程菌株遗传性状不稳定等都已成为影响Bt进一步成功推广使用的制约因素。因此，为了提高Bt制剂的杀虫效果，对其增效途径的研究已成为世界性的研究热点，主要包括：筛选增效菌株；利用化学添加剂、植物它感素、几丁质酶作为增效物质；昆虫病原微生物间的互作增效等。

目前市面上的苏云金杆菌有大多是里面添加隐性成分的，使用效果不稳定，而纯苏云金芽孢杆菌固体菌粉，由于生产工艺要求高，操作过于繁多，导致成本提高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，提供一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养发酵方法，所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基由以下重量百分比的原料组成：

糖蜜4-8％，酵母膏0.05-1％，尿素0.05-1％，磷酸氢二钾0.05-1.5％，无水乙酸钠0.05-3％，碳酸钙0.005-0.5％，硫酸镁0.005-0.05％，硫酸锰0.001-0.05％，氯化铁0.001-0.05％，麦芽汁2-8％，玉米浆2-5％，其余为无菌水；

所述苏云金芽孢杆菌的培养发酵方法包括如下步骤：

(1)将苏云金芽孢杆菌种在无菌条件下接种于斜面培养基中，进行斜面培养，控制培养温度为30-32℃，培养12-48h，得到斜面苏云金芽孢杆菌种；

(2)将步骤(1)的斜面苏云金芽孢杆菌种在无菌条件下接种于扩大培养基中，置于100-200rpm的摇床中培养12-24h，控制培养温度为30-35℃，得到苏云金芽孢杆菌种子液；

(3)将所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基的原料按重量百分比混合后，加热使物料充分溶解于水中，进行灭菌处理，然后冷却该物料至温度为40℃以下，得到苏云金芽孢杆菌的液体培养基；