[发明专利]一种快速准确鉴定越橘属植物的检测方法

说明书

本发明提出一种快速准确鉴定越橘属植物的检测方法，使用如下引物对进行检测，所述引物对的核苷酸序列如下：VcSSR11‑F和VcSSR11‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、2所示；VcSSR14‑F和VcSSR14‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3、4所示；VcSSR19‑F和VcSSR19‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5、6所示；VcSSR28‑F和VcSSR28‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7、8所示；VcSSR33‑F和VcSSR33‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:9、10所示。此外本发明还提出一种越橘属植物等位基因图谱的构建方法。参照本方法扩充等位基因图谱，丰富可用的等位基因图谱数量。

技术领域

本发明涉及分子生物学DNA标记技术与应用领域，具体涉及一种是通过DNA标记技术构建等位基因图谱来快速准确鉴定蓝莓品种及其近缘种。

背景技术

蓝莓(blueberry)原产于北美洲，是杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)植物。由于其果实具有很高的营养价值，自20世纪初期被驯化栽培以来，已在世界范围内被广泛种植。我国从1983年开始蓝莓的引种栽培，随着栽培技术不断提高，蓝莓产业发展迅猛，形成了东北地区、山东半岛、长江流域和云贵高原等4个主产区。

蓝莓分为栽培种和野生种，根据树体大小和需冷量的多少，蓝莓栽培种又可划分为北高丛蓝莓、南高丛蓝莓、半高丛蓝莓、矮丛蓝莓和兔眼蓝莓5个类型，每一种类型又包括了大量育成品种。目前全世界已报道的蓝莓品种有数百个，中国主栽的蓝莓品种几乎全部引自国外，且当前中国蓝莓产业中利用的品种主要有10余个。蓝莓的野生种广泛分布在我国西南和东北地区，野生种是选育蓝莓新品种的重要种质资源。蓝莓品种的正确识别和亲缘关系分析是蓝莓产业健康发展、科学开发及合理利用的重要前提，但我国蓝莓引种途径多，品种信息管理混乱；在生产过程中存在品种名音译、意译和自拟商品名同时存在的现象，导致种苗混乱，常出现以假乱真或以次充好的现象，使得蓝莓种植企业和种植户遭受重大经济损失。

传统的品种鉴别是基于蓝莓叶、花、果实和树姿进行的，这要求鉴定者有着丰富的蓝莓生产实践经验和扎实的植物分类学知识，而蓝莓的表型性状受栽培环境影响较大，导致这种鉴别方法准确度很低，鉴别错误的情况常常出现。蓝莓基因组DNA是不受生长地点、地形、气候条件以及植株大小的稳定存在，因蓝莓种苗的主要繁育方式为组织培养和扦插，同一蓝莓品种的不同单株属于无性系，其基因组序列完全一致，这为蓝莓不同品种的鉴别提供了物质基础。

简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR)，也称为串联重复序列，是基因组中广泛存在的一种共显性位点，具有多态性高，重复性好，易于检测的优点，通过利用已公布的表达序列标签、已完成测序的基因组序列和转录组序列可以获取SSR位点。尽管已有用于蓝莓品种及近缘种遗传图谱构建和功能基因的筛选的SSR标记，但适用于越橘属植物的EST-SSR严重不足，截至2018年3月26日，GenBank公布的越橘属表达序列标签(EST)仅有22402条，尚未见等位基因图谱应用于蓝莓品种及其近缘种进行鉴定的报道。随着第二代测序技术的不断成熟，高通量序列的获取成本越来越低，测序周期越来越短，这为从高通量序列数据中筛选SSR位点提供了便利。因此，从转录组序列中筛选出高效准确鉴定蓝莓品种及其近缘种的SSR位点，不仅能够增加越橘属EST-SSR分子标记的数量，还会为蓝莓品种及其近缘种的快速准确鉴定带来极大的便利，为蓝莓新品种的选育提供参考。

发明内容

本发明为克服现有技术中越橘属EST-SSR分子标记数量不足的缺点，构建越橘属植物的等位基因图谱，提供一种快速准确鉴定蓝莓品种及其近缘种的方法，增加越橘属分子标记的数量的同时，应用于蓝莓品种真伪的鉴定和亲缘关系分析，为今后的蓝莓新品种选育提供参考。

其是通过如下技术方案实现的：一种快速准确鉴定越橘属植物的检测方法，使用如下引物对进行检测，所述引物对的核苷酸序列如下：