[发明专利]堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测引物组、检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测引物组，其特征在于，针对堪萨斯分枝杆菌特有的ECHT基因编码序列设计并优化，所述检测引物组包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF和环引物LB，其核酸序列分别如下所示：

外引物F3：5’-GACTGTTGGCGAGTTGGT-3’

外引物B3：5’-GTCCTGGAACGTCTGCTC-3’

内引物FIP：5’-GGTGTGGCACATTGCGACAGATATAACTCGAACAGCAC-3’

内引物BIP：5’-CGGATCAGCGGTATGACGGCCGGCTGCCCGATTAGAT-3’

环引物LF：5’-GTTCTGCGACGGCGATTC-3’

环引物LB：5’-GGGATGCGTTGTCCACCA-3’。

2.根据权利要求1所述的LAMP检测引物组，其特征在于，其特征在于，外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF和环引物LB在反应体系中的摩尔比为1:1:4:4:2:2。

3.一种堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒中含有如权利要求1或2所述的堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测引物组。

4.根据权利要求3堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，其特征在于，还包括以下成分的部分或者全部：(1)DNA聚合酶；(2)LAMP反应液；(2)荧光染料或显色剂；(3)阳性对照和阴性对照。

5.根据权利要求4所述的基于智能恒温扩增技术检测金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶；LAMP反应液包括dNTP、反应缓冲液、MgSO4和甜菜碱。

6.根据权利要求4所述的基于智能恒温扩增技术检测金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于：阳性对照为含有堪萨斯分枝杆菌ECHT基因片段的载体克隆，阴性对照为不含堪萨斯分枝杆菌ECHT基因片段的水或其他溶剂。

7.根据权利要求3堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为SYBR green，所述显色剂为羟基萘酚蓝。

8.根据权利要求3堪萨斯分枝杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分：

(1)引物组：包含权利要求1所述的LAMP检测引物组，外引物、内引物和环引物的浓度均为10μM；

(2)反应液：包括dNTP、反应缓冲液、MgSO4和甜菜碱，使用时需等倍稀释；

(3)Bst DNA聚合酶：浓度为0.16U/μL；

(4)荧光染料或显色剂：荧光染料为SYBR green，显色剂为羟基萘酚蓝(HNB)；

(5)密封液：为封闭用石蜡油；

(6)去核酸水：用于补充反应体积。