[发明专利]从河豚鱼提取呈味肽的方法在审
| 申请号： | 201810475511.7 | 申请日： | 2018-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN108976275A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 谢雨欣 | 申请（专利权）人： | 浦江县美泽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;A23L27/10 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 卫翠婷 |
| 地址： | 322200 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 呈味肽 凝胶层析 滋味特性 冻干粉 河豚鱼 超滤 匀浆 椰油酰胺丙基甜菜碱 对羟基肉桂酸 葡聚糖凝胶柱 鲜味 水溶性多肽 水溶性物质 沸水 分离纯化 分离筛选 河豚鱼肉 超纯水 滤过液 莽草酸 前处理 亲水性 溶解度 提取液 甜味 呈味 多肽 分级 切向 溶出 制备 浸泡 过滤 溶解 筛选 分析 | ||
1.从河豚鱼提取呈味肽的方法，包括前处理、水溶性多肽制备、超滤分级、凝胶层析分离、RP-HPLC分离纯化，其特征在于：所述前处理步骤为：向河豚鱼肉中加重蒸水，再加入莽草酸和对羟基肉桂酸，浸泡后匀浆，备用。
2.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述莽草酸的添加量为河豚鱼肉重的0.01-0.02%，对羟基肉桂酸的添加量为河豚鱼肉重的0.01-0.06‰。
3.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述河豚鱼肉和重蒸水的固液比为1:3-5（g/mL），浸泡25-35min。
4.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述水溶性多肽制备步骤为：将匀浆中加入椰油酰胺丙基甜菜碱，然后沸水提取1-2h，过滤，离心上清液过滤，将滤液冻干，冻干粉末溶解于4-6倍的重蒸水中，微孔滤膜过滤，滤液即为水溶性物质提取液。
5.根据权利要求4所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述椰油酰胺丙基甜菜碱的添加量为河豚鱼肉重的0.003-0.005‰。
6.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述超滤分级步骤为：水溶性物质提取液在温度为20-30℃、压力为3-5MPa的条件下，经分子量截留为3-4kDa的超滤膜切向超滤，收集滤过液，冷冻干燥得冻干粉，备用。
7.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述凝胶层析分离步骤为：按固液比1:40-60（g/mL）将冻干粉用超纯水溶解，过滤后通过Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱进行分离，感官评定每个分离组分并利用电子舌测定其滋味轮廓，筛选出滋味特性强同时肽含量高的组分。
8.根据权利要求7所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述分离条件：玻璃层析柱2.0cm×50cm，上样量2-5mL，流速0.5-2mL/min，检测波长220nm。
9.根据权利要求1所述的从河豚鱼提取呈味肽的方法，其特征在于：所述RP-HPLC分离纯化步骤为：将凝胶层析分离筛选得到的呈味多肽组分配成8-12mg/mL的溶液，用RP-HPLC纯化，HPLC条件：进样体积50μL，流速1mL/min，检测波长215nm，洗脱A液：0.05%TFA溶液，洗脱B液：纯乙腈溶液，等度洗脱90%A和10%B，将收集的组分用电子舌测定其滋味轮廓，收集滋味特性强且肽含量高的组分，冷冻干燥，即得呈味肽。
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