[发明专利]同时检测血液中L-谷氨酸和L-天冬氨酸含量的方法

说明书

本发明名称为同时检测血液中L‑谷氨酸和L‑天冬氨酸含量的方法，它利用高效液相串联质谱仪对标准溶液进行标定，分别拟合得出代表L‑谷氨酸浓度的标准曲线方程为y₁＝a*x₁+b和代表L‑天冬氨酸浓度的标准曲线方程y₂＝c*x₂+d，取待测血液样品，对该待检测血液样品经过前处理后，使用相同的高效液相串联质谱仪对待测的样品进行检测，得到待测血液y₁和y₂值，将待测血液样品的y₁和y₂分别代入上述两个标准曲线方程中，通过计算分别得到待测血液样品中L‑谷氨酸和L‑天冬氨酸含量与内标物的相对浓度x₁和x₂，内标物浓度是已知的，通过计算可以得到待检测血液样品中的L‑谷氨酸和L‑天冬氨酸含量的浓度。

技术领域

本发明涉及氨基酸检测技术领域，尤其涉及一种同时检测血液中L-谷氨酸和L-天冬氨酸含量的方法。

背景技术

L-谷氨酸(L-glutamic acid，L-Glu)是一种酸性氨基酸，分子内含两个羧基，化学名称为α-氨基戊二酸，分子式为C_sH₉NO₄，化学结构式如图1所示。其是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一，是非必需氨基酸，可作为酸性氨基酸参与代谢；此外，又可作为兴奋性神经递质参与信息传递，涉及神经元和胶质细胞的增殖、发育、存活与死亡，以及学习和记忆密切相关的长时程增强效应(LTP)和长时程抑制效应(LTD)突触传递效率的可塑性变化。在脑缺血等病理情况下，脑内L-Glu浓度升高的同时，血液中L-Glu浓度也相应升高。测定血液中L-Glu升高水平可反映脑组织缺血程度的变化。

L-天冬氨酸(L-aspartic acid，L-Asp)，化学名称为L-(+)-氨基丁二酸，为酸性氨基酸之一，属非必需氨基酸，分子式为C₄H₇NO₄，化学结构式如图2所示。L-Asp是生物体内多种氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体，可作为K+、Mg+离子的载体向心肌输送电解质，从而改善心肌收缩功能，同时降低氧消耗，在冠状动脉循环障碍缺氧时，对心肌有保护作用。并参与鸟氨酸循环，增强肝脏功能，消除疲劳。此外，其是哺乳动物中枢神经系统中主要的兴奋性氨基酸类神经递质，其在脑中特定区域的浓度变化与帕金森病密切相关，表现为含量显著升高。测定血液中L-Asp水平可一定程度上反应人体生理情况的变化。

目前，国内外有关血清和血浆中L-谷氨酸和L-天冬氨酸的测定方法报道很多，其中常见的方法有：氨基酸自动分析仪法、液相色谱法、气相色谱质谱联用法、液相色谱质谱联用法等，在众多的方法中，液相色谱法或液相串联质谱法为测定维生素的首选方法。通常，样本需经衍生化方法处理后再以仪器分析定量，存在着前处理复杂、干扰因素多、分析时间长、灵敏度不高、定性定量不够准确等问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供一种同时检测血液中L-谷氨酸和L-天冬氨酸含量的方法，将内标法与高效液相色谱质谱联用法相结合，该方法以非衍生化方法进行前处理，使干扰因素大大减少，特异性强、灵敏度高、检测结果更为准确，同时分析时间缩短，并通过简化前处理步骤，缩短样品处理时间。

本发明采用的技术方案是：

本发明的一种同时检测血液中L-谷氨酸和L-天冬氨酸含量的方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液A和标准溶液B的标定