[发明专利]一种基于FRET的荧光核酸检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种基于FRET的荧光核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：一组或多组分别标记有荧光供体基团和荧光受体基团的、可用于核酸实时荧光定量的Primobe^TM；含有耐热DNA聚合酶、dNTP、PCR缓冲液的PCR反应母液；去离子水；已知浓度的标准品；阴性质控样本；阳性质控样本；

所述Primobe^TM为一组或多组分别标记有荧光供体基团和荧光受体基团的、可用于核酸实时荧光定量的寡核苷酸对；每组用于核酸实时荧光定量的Primobe^TM由2条引物组成；Primobe^TM的其中一条引物的任何位置标记荧光受体基团；Primobe^TM的另一条引物的任何位置标记荧光供体基团。

2.根据权利要求1所述的基于FRET的荧光核酸检测试剂盒，其特征在于，所述Primobe^TM采用供体发射波长与受体吸收波长存在重叠的成对的荧光供体基团与受体基团。

3.一种根据权利要求1或2所述的基于FRET的荧光核酸检测试剂盒应用于核酸实时荧光定量。

4.一种根据权利要求1所述的基于FRET的荧光核酸检测试剂盒的荧光核酸检测方法，其特征在于，具体检验步骤如下：

(1)采用试剂盒进行检测；混合待测模板DNA、Primobe^TM、PCR反应母液，用去离子水找补体积；

(2)对于基因实时定量检验，设置未知样本的重复反应、标准品梯度、阳性对照和阴性对照；

(3)启动仪器和软件，设置PCR反应参数和荧光信号采集点；

(4)进行PCR循环扩增和信号采集；

(5)对检测结果进行分析，获得核酸实时基因定量信息；

(6)每个批次检测都需要用阴性质控样本和阳性质控样本作为质量控制；对于基因定量检验，每个批次检测都需要用标准品或标准品梯度，生成标准曲线。

5.根据权利要求4所述的基于FRET的荧光核酸检测方法，其特征在于，步骤(3)中PCR反应参数应用两步法PCR或者三步法PCR。

6.根据权利要求4所述的基于FRET的荧光核酸检测方法，其特征在于，步骤(1)中荧光供体基团和受体基团标记的Primobe^TM，采用供体发射波长与受体吸收波长存在重叠的成对的荧光供体基团与受体基团。