[发明专利]用于人ApoE基因分型的引物探针组合及使用方法

说明书

本发明属于基因技术领域，提供一种用于人ApoE基因分型的引物探针组合及其使用方法。本发明针对ApoE基因点突变基因序列设计等位基因特异性引物，针对野生型序列设计封闭引物，并采用突变富集扩增反应条件，可对ApoE基因进行分型检测。本发明方法具有检测快速、操作简便、高灵敏度、高特异性和低成本的特点，结果判读简单明确，只需根据Ct值判定样品基因类型，可广泛用于人的各种DNA样本的ApoE分型检测，便利ApoE基因多态性与相关疾病关系的研究工作。

技术领域

本发明属基因技术领域，涉及用于ApoE基因分型的引物探针组合、试剂盒及其使用方法。

背景技术

载脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）基因位于人类第19号染色体长臂13区2带（19q132）上，含有4个外显子和3个内含子，全长3.7kb。载脂蛋白E是一种富含精氨酸的碱性蛋白，是一种多功能糖蛋白，ApoE蛋白参与脂质的运输、储存及排泄，同时也参与神经系统的发育和损伤后的修复。人类高发的动脉粥样硬化和阿尔茨海默症均与ApoE蛋白参与的脂质代谢调节异常有关。研究表明，ApoE基因的多态性与冠心病、高脂血症、脑梗塞的发生相关。ApoE基因常见的等位基因为E2、E3、E4三种，在人群占比分别为8%，78%，14%，其中ApoEE3是野生型基因，其编码氨基酸的112位为胱氨酸，158位为精氨酸，ApoE E2、E4分别是突变型，ApoE E2在158位的精氨酸等位基因处发生点突变转变为胱氨酸，ApoE E4在112位的胱氨酸等位基因处发生点突变转变为精氨酸。ApoE基因可以产生6种常见基因型，即3种纯合子型ApoE E2/E2、E3/E3、E4/E4和三种杂合子型ApoE E2/E3、E3/E4、E2/E4。

ApoE基因型的检测可以作为临床辅助诊断和风险率评估的指标。研究发现ApoE基因多态性与老年性痴呆病（AD）相关。1993年，Rose研究发现，晚发性家族型AD病人ApoE E4等位基因频率增多，还发现ApoE和来源于淀粉样前体蛋白的小多肽Aβ的亲和力很高。其后陆续发现AD病人中携带E4等位基因者占46.2%，而对照组占13.2%。还发现携带两个E4等位基因的研究对象比携带一个E4等位基因的研究对象发生AD年龄早，比不携带E4等位基因的研究对象发生AD年龄更早。由于基因缺陷是导致神经系统疾病的重要因素，因此可以通过基因检测有效地评估受检者患各项神经系统疾病的遗传风险，根据风险等级的高低，为其提供个性化的预防建议，同时，也可以从中找出预防的重点，从而有针对性地高效预防神经系统疾病的发生，真正起到防患于未然的作用，为受检者的健康保驾护航。

此外，ApoE基因多态性是动脉粥样硬化早期及发展过程中个体差异的主要原因。大量人群调查发现E4等位基因可以显著地升高健康人的总胆固醇浓度，更易患动脉粥样硬化，相反，E2等位基因可降低胆固醇浓度，其降低效应是E4升高胆固醇的2～3倍。研究发现ApoE E2等位基因对冠状动脉硬化的发展有防护作用，而ApoE4/3杂合子比E3/2和E3/3基因型者发生心肌梗塞年龄早。因此同样可以通过基因检测有效地评估受检者患心脑血管疾病的遗传风险，根据风险等级的高低，为其提供个性化的预防建议。