[发明专利]一种大豆耐盐性复合筛选与鉴定方法

说明书

本发明公开了一种大豆耐盐性复合筛选与鉴定方法。该方法采取发芽期、苗期相结合，连续多代持续筛选的复合策略对大豆材料进行耐盐筛选与鉴定，综合评价不同大豆种质资源的耐盐特性。本发明利用蛭石做固定基质、采用水位保持法精准控制盐分浓度，以出苗率、株高、生长状态为主要耐盐指标，经过严格可控的筛选程序获得一系列不同耐盐性且能稳定遗传的材料，为大豆优良品种培育和耐盐机理研究奠定材料基础。本发明所述方法高效可靠，简单实用，可操作性强，具有较高的生产现实意义。

技术领域

本发明涉及一种大豆耐盐性复合筛选与鉴定方法，属于农业技术领域。

背景技术

盐渍土壤主要包括内陆干旱半干旱地区的盐碱地和沿海高盐分含量的滩涂区域，在世界范围内均有广泛分布，其面积约达10亿公顷(王尊亲，1993)，在我国中西部内陆及东部沿海地区，也有约9000万公顷(李彬等，2005)的盐渍土壤大量分布，占全国耕地的面积高达20％，部分地区特别是设施农业中化肥农药的大量使用使土壤次生盐渍化日益严重，加上沿海滩涂面积不断淤涨，盐渍化土壤面积还在持续扩大。大面积土壤盐渍化，造成了大量中低产田的产生，对农业生产和农业生态环境产生了严重影响，农业综合生产能力严重下降，影响农业生产的可持续发展。与此同时，随着我国社会发展和城市建设的需要，耕地资源却日益减少，如何改良和开发利用好这些盐障土地，是我国农业可持续发展研究的重要内容，其中培育和筛选耐盐农作物越来越受到广泛的关注和重视，是解决盐障碍土地开发利用的根本途径之一。耐盐作物的研究应用不但充分发掘利用了有限的土地资源，同时也吸收稀释了盐分、增加了土壤有机腐殖质成分，改善了土壤微生物环境，对盐碱、滩涂土壤肥力提升和生态环境改良起到了重要作用，是盐渍土改良的重要生物因素之一(时津霞等，2004；Stapies,1984)。

我国是大豆的故乡，大豆资源非常丰富(盖均镒2000)，大豆因富含蛋白质、油脂及多种生物活性物质，营养价值极高，被称为“豆中之王”、“绿色牛乳”，在全国各地均有种植。大豆属中度耐盐作物，但盐胁迫仍是严重制约大豆生产的因素之一，大豆耐盐研究表明，盐对大豆生长发育具有毒害作用，可引起叶片枯萎和脱落(Parker等，1987)，既影响产量，也影响品质。据报道，植物耐盐性状是可遗传的(Wahda et al.,1997),因此如何创制和培育高耐盐作物，是改良盐碱土壤、提高滩涂地区利用效率的重要前提和基础。耐盐材料的培育一般通过杂交、基因工程和诱变的方式进行，杂交和转基因受耐盐植物资源少，耐盐基因研究进展慢，以及杂交亲和性和多基因转化技术的重重限制，技术难度大，成本高，可操作性差；与此相对，诱变是在现有资源的基础上通过物理或化学方式，诱导植物在DNA水平上产生大量的突变，并通过适宜的筛选条件和方法以获得新的耐盐材料，成本低廉、可规模化快速进行。

一般耐盐筛选的方法是在室外盐碱化土地或室内NaCl溶液水培(王敏等，2005)法进行，分析方法有方差分析和系统聚类法(张锦伟等，2004)、主成分分析法(解松峰等，2010)、隶属函数分析法(张国新等，2011)，逐步回归法(刘雅辉等，2012)等。总的来说，盐碱地筛选由于盐分不均，差异较大，随着土壤水分变化，盐分含量也相应改变，结果不稳定，筛选难度很大；水培法操作繁杂，效果差、效率低，难以推广利用。在盐碱地改良和利用过程中，如何高效快速筛选突变体植株是一个重要的内容。对作物规模化室内筛选鉴定多采用发芽期和苗期进行，但对于综合发芽期和苗期进行大豆耐盐性复合筛选鉴定的研究未见报道。本发明所述的方法，是在装填了固定基质的播种杯内进行筛选，通过水位保持法精确调控盐分浓度，在发芽期和苗期进行复合多重筛选，同时获得盐敏感和抗盐系列材料的方法，具有操作简便易行，效率高，容量大、重复性强，环境影响小的优点。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明公开了一种大豆耐盐性复合筛选与鉴定方法。该方法利用人工配制的盐溶液、采取发芽期、苗期相结合，连续多代持续筛选的复合策略对大豆种质材料进行耐盐筛选与鉴定，综合评价不同大豆种质资源的耐盐特性。

一种大豆耐盐性复合筛选与鉴定方法，包括以下步骤：