[发明专利]用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR引物组及检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR引物组，其特征在于，其包含检测副溶血性弧菌、创伤弧菌、哈氏弧菌和拟态弧菌的引物对；

所述检测副溶血性弧菌的引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ ID NO.1、SEQID NO.2所示；

所述检测创伤弧菌的引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4所示；

所述检测哈氏弧菌的引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ ID NO.5、SEQ IDNO.6所示；

所述检测拟态弧菌的引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ ID NO.7、SEQ IDNO.8所示。

2.根据权利要求1所述的用于同时检测四种致病弧菌的多重PCR引物组，其特征在于，还包含阳性内对照引物对，所述阳性内对照引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQID NO.9、SEQ ID NO.10所示。

3.一种使用引物组对副溶血性弧菌、创伤弧菌、哈氏弧菌和拟态弧菌进行多重PCR检测的方法，其特征在于，将副溶血性弧菌的检测引物对、创伤弧菌的检测引物对、哈氏弧菌的检测引物对和拟态弧菌的检测引物对与待测样品的DNA进行多重PCR反应，反应结束后对PCR反应产物进行电泳分析以确定样品中是否含有副溶血性弧菌、创伤弧菌、哈氏弧菌或拟态弧菌；其中所述副溶血性弧菌的检测引物对中的上下游引物分别具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述创伤弧菌的检测引物对中的上下游引物分别具有如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，所述哈氏弧菌的检测引物对中的上下游引物分别具有如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，所述拟态弧菌的检测引物对中的上下游引物分别具有如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在进行多重PCR反应时，反应体系中还加入阳性内对照引物对。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述阳性内对照引物对的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10所示。

6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，所述多重PCR反应按以下步骤进行：

(1)94℃预变性5min；

(2)94℃变性40s，57℃退火1min，72℃延伸1.5min，循环35次；

(3)72℃延伸10min。

7.一种用于同时检测四种致病弧菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组、阳性内对照引物对、阳性内对照模板、TaqDNA聚合酶、反应体系缓冲液、dNTP和双蒸水。