[发明专利]一种双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法

说明书

一种双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法，该方法包括以下步骤：（1）肽对照品的选择：以分子量为3kDa的罗非鱼鱼皮胶原蛋白肽为对照品；（2）检测条件的确定：包括络合物最大吸收波长的确定、线性拟合良好的肽质量浓度范围的确定、体系最适pH的确定和体系最适TCA质量浓度的确定；（3）标准曲线的建立：以多肽的质量浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。本发明检测鱼皮胶原蛋白肽含量简便、成本低、快捷、线性范围广、重复性好、准确度高，具有良好的市场应用空间。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法。

背景技术

罗非鱼是世界水产业科研和养殖生产的重点淡水养殖鱼类。近十年来，我国每年罗非鱼产量以平均 4.82% 左右的速度递增，稳居世界首位，但加工产品主要是品种单一、水平较低、附加值不高的冻鱼片和冻全鱼等，生产过程中产生了大量的下脚料，如鱼皮、鱼鳞等，约占鱼体总质量的40%～50%。这些副产物资源除少部分被加工成鱼粉作为饲料廉价出售，大多未得到充分利用，不仅严重导致生物资源浪费，也带来一系列环境问题。随着人们对生物分子结构及功能的认识不断深入以及国内加工技术的不断提高，利用鱼皮、鱼鳞提取明胶及胶原蛋白多肽的研究已成为热点，相关产业也逐渐壮大。

肽是由氨基酸组成的聚合物，主要来自于蛋白质分解的中间产物。胶原蛋白肽是胶原或明胶经酶解等处理后制得的具有较高消化吸收性、分子量约为2000~30000的产物，其不具有明胶的凝胶性能，但具有多种人体代谢和生理调节功能，如抗氧化、抗菌、降血压、抗疲劳、抗肿瘤等作用，因此在功能性食品、医学、化妆品等领域展现出高度的应用潜力，因此对多肽的功能性质和测定多肽含量方法的研究备受人们瞩目。

目前常见的多肽含量测定方法有双缩脲法、Folin-酚试剂法、OPA法(邻苯二甲醛法) 、紫外吸收法等，但同种方法测定不同类型、不同体系的多肽含量的最佳条件并不是相同的。双缩脲比色法中最大吸收波长、肽的检测浓度范围、体系pH、TCA用量这些因素会对检测方法的适用性、准确度及重现性有重要影响。各种检测方法中，标准品或对照品是必需的，以往文献及实际应用中多选用四肽（Gly-Gly-Tyr-Arg）标准品，但近几年已有文献报道说明标曲标准品或对照品的选择应尽量遵循同质性原则，即要与被测样品的生物效应尽可能具有相同的趋势，二者的反应量效曲线应当是平行的，才能进行生物效价的对比和换算，这样可以消除方法基体效应引入的系统误差。罗非鱼鱼皮胶原蛋白肽与罗非鱼源酶解多肽在成分及分子量上较为接近，而各种品牌的四肽标准品不仅不是罗非鱼源酶解蛋白肽的同源物，且价格昂贵，若将其作为标准品不仅成本高，还可能会使测定结果产生较大偏差。

本发明旨在研究选择罗非鱼鱼皮胶原蛋白肽为对照品，对双缩脲法测定多肽的操作方法进行改良，并评价其实际应用的适用性，以期将本法应用到企业及相关科研工作中检测罗非鱼源胶原蛋白肽含量中，提供一种低成本、高精度、高准确度，普适于罗非鱼源肽含量检测的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、快捷、线性范围广、重复性好、准确度高的双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法，该方法包括以下步骤：

（1）肽对照品的选择：以分子量为3kDa的罗非鱼鱼皮胶原蛋白肽为对照品；

（2）检测条件的确定：包括络合物最大吸收波长的确定、线性拟合良好的肽质量浓度范围的确定、体系最适pH的确定和体系最适TCA质量浓度的确定；

（3）标准曲线的建立：以多肽的质量浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。