[发明专利]一种嗜热属真菌PCR模板的制备方法在审
| 申请号： | 201810487854.5 | 申请日： | 2018-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN108642136A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 牛雪梅;黄为平;张克勤 | 申请（专利权）人： | 云南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/04;C12Q1/686;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京聿华联合知识产权代理有限公司 11611 | 代理人： | 刘烽 |
| 地址： | 650091*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转化子 菌体悬浮液 真菌 制备 高通量筛选 真菌基因组 方法使用 科学意义 快速鉴定 特异性强 无毒环保 真菌遗传 真菌转化 菌丝体 菌体量 灵敏度 裂解 省力 省时 加热 申请 悬浮 检测 | ||
1.一种嗜热属(Thermomyces)真菌PCR模板的制备方法，其包括以下步骤：
1)将所述嗜热属真菌的菌丝体悬浮于TE缓冲液中，得到菌体悬浮液；
2)将所述菌体悬浮液在90℃以上的温度下加热8分钟至10分钟，得到裂解的菌体悬浮液用作PCR模板。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，加热的温度为97至100℃。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，加热的时间为10分钟。
4.根据权利要求1至3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤2)之后的步骤3)，将所述裂解的菌体悬浮液冷冻处理5分钟以上，优选将所述裂解的菌体悬浮液冷冻处理8至15分钟后，恢复至室温得到冷冻处理的裂解的菌体悬浮液以用作PCR模板使用。
5.根据权利要求1至4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤4)，将步骤2)中的所述裂解的菌体悬浮液或步骤3)中的冷冻处理的裂解的菌体悬浮液离心，得到上清液作为PCR模板。
6.根据权利要求1至5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述菌丝体与所述TE缓冲液的质量体积比为(0.1mg-10mg)：100μl。
7.根据权利要求1至6中任意一项所述的方法，其特征在于，所述TE缓冲液包括8mM至12mM的Tris-HCl和0.05mM至0.5mM的EDTA，所述TE缓冲液pH值为7至8。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述TE缓冲液包括10mM至12mM的Tris-HCl和0.1mM至0.2mM的EDTA，所述TE缓冲液pH值为7.5至7.8。
9.根据权利要求1至8中任意一项所述的方法，其特征在于，所述嗜热属真菌为嗜热杜邦菌(Thermomyces dupontii)和/或嗜热棉毛菌(Thermomyces lanuginosus)。
10.一种嗜热属(Thermomyces)真菌阳性遗传转化子的鉴定方法，其包括如下步骤：
以如权利要求1至9中的任意一项所述的方法获取所述嗜热属(Thermomyces)真菌的PCR模板，然后进行PCR筛选。
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