[发明专利]基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子的方法

权利要求书

1.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感器，其特征是，包括适体DNA、分子信标；

所述适体DNA的中部含有能够对PDGF-BB进行特异性识别的适体序列，当适体DNA未与PDGF-BB结合时，适体DNA呈现的构象含有至少3个小茎-环结构，当适体DNA与PDGF-BB结合时，适体DNA呈现的构象含有一个大茎-环结构，且大茎-环结构的环结构含有至少2个小茎-环结构，且大茎-环结构的5′端和3′端均具有未杂交的自由序列；

所述分子信标的DNA序列能够与大茎-环结构的5′端和3′端的自由序列互补，且互补后分子信标的5′端长于大茎-环结构的3′端；

所述DNA序列由5′端至3′端的序列为：

TGCACCTCAGCAGCAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTGCATCCGAGCAGGAACGA；

所述分子信标由5′端至3′端的序列为：

CGACTCGTTCCTGCTCGGATCTGAGGTGCAGTGAAAACGAGTCG。

2.一种与权利要求1所述的传感器配合的引物DNA，其特征是，所述引物DNA能够引发脱氧核糖核苷酸以分子信标的DNA序列为模板进行聚合，且引物DNA中含有DNA剪切酶的识别位点；

引物的序列为：CGACTCGT。

3.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感系统，其特征是，包括权利要求1所述的传感器、权利要求2所述的引物DNA。

4.一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的方法，其特征是，将含有PDGF-BB的待测物与权利要求1所述传感器混合，PDGF-BB与适体DNA结合后，适体DNA产生构象变化，使其在5′端和3′端裸露出能够与分子信标1的DNA序列互补的自由序列，并与分子信标1的DNA序列杂交，然后权利要求2所述引物DNA与分子信标1的5′端的序列结合，在DNA聚合酶的作用下，以分子信标1为模板生成DNA序列并替换适体DNA，从而形成双链DNA，被替换的适体DNA与分子信标2的DNA序列杂交，然后在引物DNA和DNA聚合酶的作用下循环产生大量双链DNA，双链DNA在DNA剪切酶以及DNA聚合酶的作用下再次以分子信标为模板形成双链DNA并替换出分子信标1的互补链，产生的互补链与分子信标3杂交，从而放大荧光信号；

所述分子信标1、2、3由5′端至3′端的序列均为：

CGACTCGTTCCTGCTCGGATCTGAGGTGCAGTGAAAACGAGTCG 。

5.如权利要求4所述的方法，其特征是，步骤为：将适体DNA加入至含有PDGF-BB的待测物中预反应一段时间，然后加入KF缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、DNA剪切酶、NEB 2缓冲液、分子信标、引物DNA培育一段时间后进行荧光检测。

6.如权利要求5所述的方法，其特征是，预反应的时间为15～20min。

7.如权利要求5所述的方法，其特征是，培育的时间为1±0.1h。

8.如权利要求5所述的方法，其特征是，培育后进行终止聚合反应后进行荧光检测。

9.一种荧光检测PDGF-BB的试剂盒，其特征是，包括权利要求1所述的传感器、权利要求5所述的引物DNA、DNA聚合酶、DNA剪切酶、dNTPs。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征是，包括KF缓冲液、dNTPs、NEB2缓冲液。