[发明专利]基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子的方法

说明书

本发明公开了基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子的方法。采用的传感器包括适体DNA、分子信标；适体DNA的中部含有能够对PDGF‑BB进行特异性识别的适体序列，当适体DNA未与PDGF‑BB结合时，适体DNA呈现的构象含有至少3个小茎‑环结构，当适体DNA与PDGF‑BB结合时，适体DNA呈现的构象含有一个大茎‑环结构，且大茎‑环结构的环结构含有至少2个小茎‑环结构，且大茎‑环结构的5′端和3′端均具有未杂交的自由序列；分子信标的DNA序列与大茎‑环结构的5′端和3′端的自由序列互补，互补后分子信标的5′端长于大茎‑环结构的3′端。本发明能够进行简单、快速、高灵敏、高选择性的定量检测。

技术领域

本发明属于荧光检测生物分子技术领域，具体涉及基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)的方法。

背景技术

蛋白质作为机体细胞的重要组成部分，是人体组织更新和修补的主要原料。在生物体的各项生命活动扮演及其重要的角色，尤其是与癌症相关蛋白质的识别、筛选、检测和定量分析在临床医疗诊断、预防、治疗显得格外重要。一般来说，肿瘤标志物检测的通用方法都是基于其与相应抗体的特意识别。通过与其他技术的联合，如拉曼散射、分子信标、电化学传感器、功能化的金属纳米粒子和滚环扩增，各种各样的检测策略得到发展。然而这些方法通常受限于窄的线性范围、多重分析步骤、酶标记以及精密的实验设备。因此发展简单、快速、高灵敏、高选择性以及不费时的蛋白质定量方法依然备受期待，尤其在一些资源相对匮乏的地区。

核酸适体是一种通过指数富集的配基系统进化技术人工合成的短链核酸(DNA或RNA),能与相应的蛋白质或靶标特异性结合。在电化学、场效应晶体管、压电晶体的基础上，许多适配体传感器得以构建。

分子信标技术是一种建立在碱基互补配对和荧光共振能量转移原则上的分析策略，具有极好地专一性以及选择性使得它在基础医学、生物学上得到广泛应用。当没有靶标存在时，分子信标处于发夹状，荧光基团与猝灭基团之间的距离足够近可发生荧光共振能量转移。荧光被猝灭基团吸收以热量的形式消散，此时的荧光背景很低。然而随着靶标加入，分子信标环状区碱基与靶标互补配对形成刚性的DNA双螺旋结构使得茎秆区被打开导致荧光基团与猝灭基团分离，阻碍了荧光共振能量转移过程，最终荧光得以恢复。

PDGF-BB作为人体血小板中含有的一种促进细胞有丝分裂、趋化活性的生长因子，在正常细胞中含量较少，但在一些人类肿瘤细胞中却常常发生基因过表达，是癌症诊断中的一种标志物。然而，现有文献中极少关于如何利用适体、分子信标对PDGF-BB进行简单、快速、高灵敏、高选择性的定量检测。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的之一是提供一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感器。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子BB的传感器，包括适体DNA、分子信标；

所述适体DNA的中部含有能够对PDGF-BB进行特异性识别的适体序列，当适体DNA未与PDGF-BB结合时，适体DNA呈现的构象含有至少3个小茎-环结构，当适体DNA与PDGF-BB结合时，适体DNA呈现的构象含有一个大茎-环结构，且大茎-环结构的环结构含有至少2个小茎-环结构，且大茎-环结构的5′端和3′端均具有未杂交的自由序列；

所述分子信标的DNA序列能够与大茎-环结构的5′端和3′端的自由序列互补，且互补后分子信标的5′端长于大茎-环结构的3′端。