[发明专利]一种用于血管紧张素转化酶活性检测的质谱探针及其应用

说明书

本发明公开了一种用于血管紧张素转化酶活性检测的质谱探针及其应用，属于药物筛选与评价技术领域。所述的质谱探针，包括氨基酸序列为Asp‑Ser‑Asp‑Lys‑Pro的多肽及修饰在所述多肽N端的天冬氨酸上的哌嗪类化合物。本发明提供的质谱探针由可被血管紧张素转化酶特异性识别的多肽Asp‑Ser‑Asp‑Lys‑Pro与高质谱响应的小分子哌嗪类化合物连接而成，不仅能被血管紧张素转化酶特异性识别并酶切，同时具有极高的质谱响应，质谱检测准确度高，能够准确反应血管紧张素转化酶的活性或血管紧张素转化酶抑制剂的抑制活性，也非常适用于从中药等复杂体系中筛选具有血管紧张素转化酶抑制活性的化合物。

技术领域

本发明涉及药物筛选与评价技术领域，具体涉及一种用于血管紧张素转化酶活性检测的质谱探针及其应用。

背景技术

血管紧张素转化酶(Angiotensin-Converting Enzyme，ACE)是一种锌依赖型的膜结合外肽酶，广泛分布于哺乳动物的组织中。ACE可以通过肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system，RAS)和激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein-kinin system，KKS)催化血管紧张素I转化为血管紧张素II，并使缓激肽失活，导致血压上升。此外，这两个系统对电解质和体液平衡、心血管系统发育和功能重塑也起着重要的调节作用。因此，ACE已成为治疗高血压、急性心肌梗死和心力衰竭等疾病的重要靶点。

ACE抑制剂，如卡托普利、依那普利、贝拉普利等，已作为治疗高血压和心力衰竭的一线药物应用于临床。然而长期使用这些药物容易导致咳嗽、蛋白尿、肾功能衰退等副作用。近年来，从天然产物和传统中药中发现具有ACE抑制活性的新化合物已成为药物筛选领域的一个研究热点。

ACE抑制剂的筛选依赖于相应的酶活性检测方法。目前，ACE活性的检测方法主要包括荧光光度法、分光光度法、高效液相色谱法、酶偶联法等。这些方法大都需要通过多个步骤进行样本处理、操作繁琐且存在灵敏度较低的问题。此外，这些方法的检测原理基本都是光学检测，容易受到本底的干扰。天然产物成分复杂，在底物的检测波段可能存在较强的吸收，因此这些方法较难直接应用于天然产物的筛选。

公开号为CN1831529A的专利文献公开了一种用高效液相色谱和质谱联用快速筛选血管紧张素转化酶抑制剂的方法，以马尿酸双甘肽或马尿酸组氨酸亮氨酸为底物，纯化的兔肺血管紧张素转化酶或人空白血浆为血管紧张素转化酶的来源，在水浴中加热反应，过滤膜或离心之后，用高效液相色谱对血管紧张素转化酶反应混合溶液中底物、产物以及所加内标进行分离后，在电喷雾质谱的负离子模式下检测血管紧张素转化酶催化底物水解所生成的马尿酸。

肽段化学衍生是蛋白质谱分析中常用一种样品预处理技术，通过在肽段的氨基、羧基或巯基上引入易电离的小分子标签，提高肽段的灵敏度和专属性并拓展质谱的检测范围。该技术为设计高质谱灵敏度的酶底物提供了一种新思路。

发明内容

本发明的目的在于提供一种的高质谱响应的质谱探针，作为酶底物，被血管紧张素转化酶特异性识别，通过质谱测定酶切反应前后的探针或酶切产物的量来检测血管紧张素转化酶的活性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于血管紧张素转化酶活性检测的质谱探针，包括氨基酸序列为Asp-Ser-Asp-Lys-Pro的多肽及修饰在所述多肽N端的天冬氨酸上的哌嗪类化合物。

本发明的质谱探针由可被血管紧张素转化酶特异性识别的多肽与高质谱响应的小分子连接而成。所述多肽的氨基酸序列为：天冬氨酸-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(SEQ ID NO.1)，所述的高质谱响应的小分子为哌嗪类化合物，哌嗪类化合物的-NH与多肽链N端的天冬氨酸的羧基缩合。