[发明专利]一种骨桥蛋白特征肽及其应用

权利要求书

1.一种液质联用检测乳品中骨桥蛋白含量的方法，其特征在于，采用如下方案：

(1)取待检测的样品，用水稀释，经变性处理、胰蛋白酶酶解处理后，再加入甲醛溶液进行二甲基化处理，得到预处理后的样品溶液；

(2)取骨桥蛋白特征肽的标准品，用水稀释，经变性处理和胰蛋白酶酶解处理后，再加入同位素标记的甲醛溶液进行二甲基化处理，得到骨桥蛋白的内标肽溶液，

骨桥蛋白特征肽，氨基酸序列为GDSVAYGLK；

(3)将所述内标肽溶液加入至所述样品溶液中混合，得到待测样品；

(4)对所述待测样品进行固相萃取，再采用高效液相色谱-质谱联用技术进行检测；

(5)根据检测结果，计算待测样品中所述骨桥蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；

(6)将所述峰面积比代入标准曲线中，计算得到待测样品中骨桥蛋白特征肽的浓度，最后计算得到样品中骨桥蛋白的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述固相萃取的条件为：萃取柱采用HLB固相萃取小柱，洗脱溶液采用甲醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，高效液相色谱的检测条件为：色谱柱：Acquity BEH 300C18柱，1.7μm，2.1×100mm；柱温：35℃；进样体积：10μL；样品温度：15℃；流动相A：0.1％甲酸-水，流动相B：0.1％甲酸-乙腈，流速为0.3mL/min。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，质谱的条件为：电喷雾模式：ESI⁺；质谱扫描方式：多反应监测；毛细管电压4.5kV；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：325℃，脱溶剂气流量：10L/min；鞘气温度：375℃，鞘气流量：11.5L/min。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述标准曲线由以下方法获得：将骨桥蛋白特征肽配制成系列浓度的标准溶液，经步骤(2)得到内标肽溶液，再经高效液相色谱-质谱联用技术分析，计算得到各标准品中骨桥蛋白特征肽与相应的内标肽的峰面积，绘制得到标准曲线。