[发明专利]一种骨桥蛋白特征肽及其应用

说明书

本发明公开了一种骨桥蛋白特征肽及其应用，该特征肽的氨基酸序列为GDSVAYGLK。本发明通过筛选骨桥蛋白的特征肽，获取该特征肽相应的内标肽，并利用高效液相色谱与质谱联用的分析技术，实现了骨桥蛋白的定量检测，该方法具有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种骨桥蛋白特征肽及其应用。

背景技术

骨桥蛋白(OPN)是一种高度磷酸化，并且带负电的非胶原性骨基质糖蛋白，约含300个氨基酸残基，其中天冬氨酸、丝氨酸和谷氨酸残基占有很高的比例，约占总氨基酸量的一半。骨桥蛋白(OPN)中含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列，该序列在不同物种的骨桥蛋白(OPN)中都普遍存在，对于骨桥蛋白(OPN)发挥粘附功能起着重要的作用。

骨桥蛋白广泛分布于多种组织和细胞中，发挥着重要的作用：(1)骨桥蛋白(OPN)在对抗感染的非特异性免疫及自身免疫中起一定作用，有助于控制炎症反应的强度，调节组织修复的进程；(2)通过破坏晶体网阵而抑制草酸钙晶体的增长；(3)磷酸化的骨桥蛋白(OPN)能抑制钙矿化，促进骨细胞对钙离子的吸收；(4)骨桥蛋白(OPN)在血管重塑过程中起调节作用，能抑制动脉钙化的发生等等。

申请公布号为CN104165913A的中国专利申请文献公开了一种检测骨桥蛋白的电化学传感器及其构建方法，该电化学传感器为三电极体系，其中，铂丝电极作为对电极、饱和甘汞电极作为参比电极、修饰后金电极作为工作电极，所述修饰后金电极具有三维结构，先通过金巯键在金电极表面修饰ω-巯基十一酸(MUA)与6-巯基己醇(MCH)，再利用氨基与羧基的交联反应连接三维材料葡聚糖胺，短肽的羧基与葡聚糖胺的氨基相连，骨桥蛋白抗体通过Fc末端与短肽相连，即得到修饰后金电极；所述的短肽的序列为：Acetylated-HWRGWVA。该发明结合电化学技术和三维材料的优势，制备出一种新型的电化学生物传感器，通过交流阻抗方法对OPN进行高特异性定量检测。

申请公布号为CN101485381A的中国专利申请文献公开了牛乳中骨桥蛋白的提取方法，该方法按以下步骤实现：(1)离子交换色谱分离：1000～2000mL牛乳离心15～30min，去除沉淀物后与200～400mL DEAE-Sephacel树脂混合，在3～6℃条件下搅拌12～24h，然后静止，去除沉淀物后灌入色谱柱中，再在流速为3～5mL/min的条件下用浓度为0.01～0.015mol/L、pH值为7.2～7.6的磷酸缓冲溶液平衡色谱柱，然后在流速为3～5mL/min、检测波长为280nm的条件下进行梯度洗脱，梯度洗脱分三个阶段完成，并分别收集每一阶段的梯度洗脱液；(2)采用疏水色谱对步骤一获得的梯度洗脱液分别进行分离，分别获得含有骨桥蛋白的粗纯化组分的洗脱液；(3)再采用疏水色谱分别分离步骤二获得的含有骨桥蛋白的粗纯化组分的洗脱液，然后将收集液混合；(4)透析：采用去离子水进行透析，每2～6h更换一次去离子水；五、冻干：真空条件下在3～6℃干燥，即得到牛乳中的骨桥蛋白。

但是，对于利用骨桥蛋白的特征肽进行乳品中骨桥蛋白的定量检测的研究还未见报道。

发明内容

本发明提供了一种骨桥蛋白特征肽及其应用，该特征肽以及利用特征肽的检测方法能够准确检测乳品中骨桥蛋白的含量，具有较高的特异性、灵敏度、回收率和精密度。

具体技术方案如下：

一种骨桥蛋白特征肽，氨基酸序列为GDSVAYGLK。

本发明还提供了一种用于检测乳品中骨桥蛋白含量的内标肽，其氨基酸序列为

GDSV*AYGL*K。

本发明还提供了一种液质联用检测乳品中骨桥蛋白含量的试剂盒，包括骨桥蛋白特征肽和所述骨桥蛋白特征肽相对应的内标肽，所述骨桥蛋白特征肽的氨基酸序列为GDSVAYGLK；所述内标肽的氨基酸序列为GDSV*AYGL*K。